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弓形虫病是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)所引起的人畜共患病,广泛流行于世界各地。弓形虫病对孕产妇的危害已得到临床医务工作者公认。孕妇感染弓形虫后,可通过胎盘将弓形虫垂直传播给胎儿,造成流产、死胎、畸胎、新生儿智力发育不全、婴儿先天性弓形虫病等。近年来随着对艾滋病、恶性肿瘤等免疫功能损伤患者因感染弓形虫而导致死亡报道的增多而逐渐引起重视。因此,早期诊断弓形虫病对于预防异常胎儿及将弓形虫病对孕妇的危害降到最低限度具有重要的意义。目前临床常用病原学检查、血清学试验及分子生物学等方法诊断弓形虫病。动物接种分离和细胞培养操作复杂,阳性率又不高,现代分子生物学方法对实验室条件要求较高且需要经过严格训练的专门技术人员,血清学方法检测相应的抗体虽然操作简单,特异性好,灵敏度高,但不能区分现症感染和既往感染,因此研制检测能代表现症感染的循环抗原的技术是一项迫切的任务。 研究证实 IgY具有特异性抗体产量高、不与哺乳动物免疫球蛋白发生血清交叉反应、制备及提纯简单、性质稳定等特点。为了探讨 IgY在弓形虫病诊断中的应用价值,本研究采用物理过滤方法制备弓形虫可溶性抗原,再用这种抗原免疫鸡,制备并纯化特异性抗弓形虫可溶性抗原的鸡卵黄免疫球蛋白(Eggyolk immunoglobulin,IgY),BCA法测定蛋白含量,进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析, ELISA法行抗弓形虫可溶性抗原IgY与弓形虫可溶性抗原结合试验,同时行感染弓形虫大鼠血清与弓形虫可溶性抗原结合试验,通过两次试验比较,探讨抗弓形虫可溶性抗原IgY应用于弓形虫病诊断的可能性。 采用物理过滤法制备弓形虫可溶性抗原,浓度为550.5μg/ml。每枚鸡蛋经EGGstract IgY Purication System提取及纯化后,抗弓形虫IgY浓度为5252.3μg/ml。纯化后的IgY经还原型SDS-PAGE鉴定,有3条主带,分子量分别为80kDa、60kDa、38kDa,非还原型SDS-PAGE鉴定,有2条主带,分子量分别为180kDa、60kDa。ELISA结果显示,当抗弓形虫可溶性抗原IgY稀释度为1:200时,可检出0.13～0.25μg/100μl的弓形虫可溶性抗原。而相同稀释度的感染弓形虫大鼠血清只可检出1μg/100μl的弓形虫可溶性抗原。抗弓形虫可溶性抗原 IgY稀释度为1:10时可检测出0.02μg/100μl的弓形虫可溶性抗原。以上结果提示,基于抗弓形虫IgY检测弓形虫的循环抗原是可行的。 抗弓形虫鸡卵黄抗体与弓形虫抗原结合的敏感性优于感染弓形虫大鼠血清与弓形虫抗原结合的敏感性,制备及提纯简单,纯度高,制备周期短,抗体效价高,是一种极具前景的诊断制剂。