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牙槽骨吸收是成人牙缺失的首要原因,也是最为常见的人类骨破坏性疾病,不仅影响咀嚼、发音、进食等功能,而且影响患者的身心健康和生活质量。研究牙槽骨吸收的机制,针对其发病的机理,寻找抑制骨吸收、促进骨形成的靶点,进而调控该靶点的微环境对于防治牙槽骨吸收具有重要的实际意义。寡核苷酸MT01是一种根据人线粒体DNA序列设计的单链寡脱氧核苷酸。在本课题组前期工作中已证实,MT01能够促进成骨细胞活化,并且能够抑制大鼠牙周炎模型牙槽骨吸收。有研究表明MT01可以靶向阻断细胞内TLR-9的激活,减轻组织的炎症性损伤。本课题拟在文献检索与前期研究基础上进一步探讨MT01抑制成骨细胞内TLR-9的激活;以及对成骨细胞内与牙槽骨吸收关系密切的细胞因子表达的影响;检测MT01是否可调控成骨细胞内致炎细胞因子的表达;为深入研究MT01抑制牙槽骨吸收的作用与机制奠定实验基础。实验目的:通过real-time PCR的方法,检测MT01作用于成骨细胞后TLR-9、骨吸收刺激因子IL-1和TNF-αmRNA的表达,在基因水平上进一步评估特定序列的寡核苷酸在调控骨改建方面的作用与机制。实验方法:采用real-time PCR检测寡核苷酸MT01体外刺激成骨样细胞系MG63细胞内TLR-9及骨吸收刺激因子IL-1和TNF-α的mRNA基因表达情况。实验设计为两组,分别是MT01组、空白对照组,每组三复孔。取6h、12h、24h、48h与72h五个时间点进行检测。检测结果采用SPSS18.0统计软件,应用单因素方差(One-wayANOVA)进行统计学分析,P<0.05为具有统计学意义。实验结果:结果显示:①与对照组相比,MT01组6h、48h、72h时成骨细胞内TLR-9mRNA表达水平显著降低;②与对照组相比,MT01组6h、24h、48h、72h时成骨细胞内IL-1mRNA表达水平显著降低;③与对照组相比,MT01组24h、72h时成骨细胞内TNF-αmRNA表达水平显著降低。结论:MT01可抑制成骨细胞内TLR-9、IL-1与TNF-αmRNA的表达,提示MT01促成骨的作用机制可能与成骨细胞内促炎细胞因子基因表达异常有关。