论文部分内容阅读
分子印迹聚合物（MIP）具有分子识别性强、固定相制备简便快速、性质比较稳定、溶剂消耗量小、模板和MIP都可以回收再利用等优点，在对映体和异构体的分离、固相萃取、缓控释给药系统、临床药物分析、膜分离技术、模拟酶催化、化学仿生传感器等领域中展现了良好的应用前景。以MIP为基础，针对传统抗病毒药物筛选既繁琐危险性较高，又对实验条件要求极高的缺点，建立抗病毒中药有效成分分离筛选鉴定一体化的非生物学药物筛选技术具有重要的应用价值。本文以奥司他韦（OS）为模板分子，用本体聚合法合成了分子印迹聚合物并进行评价，期以应用OSMIP-HPLC-MS法筛选新型抗流感病毒化合物。1、概述了抗流感病毒的药物及其作用原理，非生物学药物筛选方法的定义及各种方法的研究现状，分子印迹聚合物的合成方法、试剂选择及其在有效成分群的分离、活性成分筛选和抗病毒药物领域的应用情况。2、建立了薄层色谱法对OS的快速鉴别。以甲醇-乙酸乙酯-甲苯-三乙胺（2 : 4 : 2 : 1）为展开剂，硅胶GF254板展开后，254 nm下出现暗斑，Rf约为0.5。3、应用液相色谱串联质谱仪，建立OS的含量测定方法。应用C18柱，流动相甲醇-水（75 :25，V/V），结果显示OS准分子离子峰[M+H]+ m/z 313.30，子离子m/z 166.20和208.20分别为定量离子和辅助定性离子，在5～160 ng·mL-1的范围内线性关系良好（R2=0.9995），平均回收率为100.94%，日内精密度和日间精密度分别为99.89%和98.90%。4、以印迹聚合物对OS的吸附量为指标，应用U8（82×42）均匀设计优化了OS-MIP的合成参数。优化后的结果为：0.1 mmol的OS，功能单体0.69 mmol，EGDMA 5 mmol，30%AA + 70% 4-VP作为功能单体，致孔剂选用甲苯。所合成的OS-MIP和NIP对OS的吸附量分别为220.9543μg·50mg-1和12.0817μg·50 mg–1。5、应用扫描电镜，对聚合物进行形态学观察。合成的OS-MIP与NIP相比质地较松，易碎。从扫描电镜照片中可以清楚的看到位于OS-MIP网状结构中的小孔。相比于OS-MIP，NIP表面较为光滑，孔穴也比较小而且数量少。6、为了确定OSMIP-HPLC自制柱对模板分子的吸附能力，应用液相色谱串联质谱进行了OSMIP-HPLC自制柱对OS、阿司匹林、绿原酸、连翘苷及混合物分离情况的测定。结果显示OSMIP-HPLC柱能够完全地分离模板分子及其他化合物。阿司匹林、绿原酸、连翘苷的保留时间在35min左右，模板分子的保留时间在110 min左右（理化性质不同，保留时间会有所变化）。从以上结果可以看出，应用薄层色谱检测OS的方法操作简便、快速，可用于市面上OS的真伪鉴别；应用液相色谱串联质谱进一步测定OS含量的方法，为下一步检测分子印迹聚合物对模板分子的吸附量提供了技术支持；应用均匀设计优化OS-MIP合成参数，得到的OS-MIP对OS有较强的吸附性；对聚合物进行扫描电镜观察，结果显示OS-MIP的形态符合印迹聚合物的形态特征；对OSMIP-HPLC柱的评价实验证明了自制柱对OS有特异性吸附选择性且实现了模板分子及其他化合物的分离，OS-MIP-HPLC自制柱可用于下一步从中草药中筛选与OS结构类似化合物的研究。