斑马鱼hemgn基因的克隆、表达模式和功能初探

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Hemgn是一种定位于细胞核内的核蛋白,已有的研究表明它可能与哺乳动物的造血过程有关。在小鼠中,hemgn与人的EDAG (Embryonic Develop Associated Gene)及大鼠RP59高度同源,在胚胎发育过程中表达在卵黄囊的血岛、原始造血细胞,胚胎肝组织、成年后主要表达在骨髓和脾脏。进一步的研究发现,hemgn受GATA-1调控,且具有转录激活活性,可调节多种造血相关基因的表达。RP59在大鼠胚胎发育阶段的表达与hemgn相似,但同时与大鼠的骨发育有关。在家禽鸡中也存在其同源基因cHEMGN,它不仅表达于造血器官中,而且还表达于性腺中,推测它可能参与鸡的性别分化。因此,hemgn是一种造血组织特异表达,对造血细胞增殖、分化起重要调控作用的新基因,参与了造血发生多个过程的调控。但目前对其作用机制尚缺乏深入的了解。与在哺乳动物中的研究相比,在鱼类中还未见对hemgn基因的报道。本论文首先对斑马鱼hemgn基因进行了克隆和进化分析、然后对其组织分布、胚胎发育时期的时空表达进行了研究。序列分析显示,斑马鱼hemgn基因全长1075bp,编码198个氨基酸,它与其他脊椎动物物种的同源性较低,约为19%。共线性分析显示,它与人、小鼠的同源基因都处于相似的基因座位上,因此,我们认为所克隆的基因即为斑马鱼的hemgn,命名为zhmgn。更进一步的进化分析显示,hemgn仅存在于部分脊椎动物中,推测可能是进化过程中出现的一种新基因。用实时定量PCR实验进行组织表达分析显示,zhmgn基因的转录本在肾脏中的表达量最高,其次在肝脏、脾脏、肠及心脏中表达,在眼、肌肉和脑中的表达量相对较低。胚胎整体原位杂交显示,受精卵发育到咽裂期之前(24hr),hemgn没有检测到转录本表达,在咽裂期之后有表达,在48hr表达于孵化腺,胸鳍以及鼻板处等部位。另外,zhmgn转染人白血病细胞K562后发现细胞数目明显减少,说明zhmgn对K562细胞生长有一定抑制作用。本文描述了zhmgn基因的组织表达以及胚胎时空表达模式,zhmgn具有抑制细胞生长(或可能有促进细胞凋亡的作用),这些结果为以后zhmgn基因功能的深入研究奠定了一定的基础。
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