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妊娠期由于激素水平改变导致阴道微环境改变,正常阴道菌群中乳酸杆菌数量下降,而加德纳菌及一些厌氧菌数量增多,孕妇容易发生阴道感染性疾病,尤其是妊娠期细菌性阴道病发生率逐年上升,复发率高,可导致多种不良妊娠结局。大量的研究结果表明,阴道乳酸杆菌对于维持妊娠期正常阴道微环境发挥着重要作用。妊娠期细菌性阴道病目前的研究主要集中在应用乳酸杆菌的微生态治疗和妊娠期细菌性阴道病的筛查,筛查的焦点在于阴道PH值能否成为妊娠期细菌性阴道病的筛查指标,进而预防不良妊娠结局的发生。在本研究中,我们通过定期检测妊娠期不同孕周阴道PH值了解阴道乳酸杆菌含量干预前后的变化情况,同时应用RAPD技术鉴定妊娠期阴道菌群中的乳酸杆菌菌株是否发生变化。第一部分定量检测妊娠期阴道乳酸杆菌含量及RAPD法鉴定乳酸杆菌菌株【目的】(1)观察妊娠期阴道PH值及阴道乳酸杆菌含量干预前后的变化情况;(2)观察妊娠期阴道PH值及阴道乳酸杆菌含量二者相互变化的关系;(3)鉴定妊娠期阴道内乳酸杆菌菌株干预前后的变化情况;【方法】(1)从确定孕妇早孕开始至顺产分娩及产后复查,期间定时检测其阴道PH值和阴道乳酸杆菌含量;同时对乳酸杆菌进行培养,菌落计数、革兰染色及随机扩增多态性DNA分析法进行阴道乳酸杆菌菌株鉴定;(2)孕妇通过晚孕前期口服补充乳酸杆菌后,定期检测阴道PH值和阴道乳酸杆菌含量;同时对乳酸杆菌进行培养菌落计数、革兰染色及随机扩增多态性DNA分析法进行阴道乳酸杆菌菌株鉴定;【结果】(1)根据染色结果显示,正常阴道分泌物中的乳酸杆菌是以大的革兰阳性杆菌为主,排列成单、双、短链状或栅状;(2)根据妊娠期不同孕期阴道乳酸杆菌菌落培养计数结果显示:晚孕后期阴道乳酸杆菌含量最低,同时整个妊娠期不同孕期乳酸杆菌RAPD结果显示,扩增的乳酸杆菌目的片段均在520bp处;两例随访性较好的孕妇阴道乳酸杆菌RAPD结果显示,扩增的乳酸杆菌目的片段也均在520bp处;(3)根据妊娠期给予口服补充乳酸杆菌后,不同孕期阴道乳酸杆菌菌落培养计数结果显示:阴道乳酸杆菌含量在孕38周最高,同时RAPD结果显示,扩增的乳酸杆菌目的片段均在520bp处;同时以一例随访性较好的孕妇阴道乳酸杆菌RAPD结果显示,扩增的乳酸杆菌目的片段仍处于520bp处。【结论】妊娠期阴道内定植的乳酸杆菌菌株干预前后无明显变化。第二部分妊娠期阴道PH值及阴道乳酸杆菌含量的变化【目的】观察妊娠期阴道乳酸杆菌含量和阴道PH值的变化情况及两者之间的相互变化关系。【方法】选取30例孕妇,从确定早孕开始至顺产分娩及产后复查定时检测阴道PH值,用MRS培养基培养,菌落计数法定量乳酸杆菌含量、常规革兰染色、随机扩增多态性DNA分析法鉴定乳酸杆菌菌株。【结果】(1)妊娠期不同孕期阴道PH值的变化:妊娠期阴道PH值从早孕期至晚孕前期明显升高(PH=3.670 VS PH=4.005),晚孕前期达到最高(PH=4.005),晚孕前期至产后复查期间阴道PH值下降明显,但仍高于早孕期阴道PH值;(2)妊娠期不同孕期阴道乳酸杆菌含量的变化:妊娠期阴道乳酸杆菌含量明显下降,其中中孕期至晚孕后期下降明显(5.042x10~7 VS 1.604x10~7),早孕期至中孕期(5.400x10~7 VS 5.042x10~7)和晚孕后期至产后两个时间段变化平缓(1.604x10~7 VS1.683x10~7);(3)妊娠期阴道PH值和阴道乳酸杆菌含量的相互变化关系:妊娠期阴道PH值与阴道乳酸杆菌含量呈负相关(r=-0.148,P=0.007)。【结论】妊娠期阴道PH值随着孕期的推进而升高,阴道乳酸杆菌含量随着孕期的推进而下降;通过观察妊娠期阴道PH值及乳酸杆菌含量变化情况,定期检测阴道PH值,适时外源性补充乳酸杆菌可有效预防妊娠期阴道感染性疾病,减少不良妊娠的发生率。第三部分妊娠期阴道PH值及阴道乳酸杆菌含量干预后的变化【目的】研究妊娠期及产后通过外源性补充乳酸杆菌后阴道PH值和阴道乳酸杆菌含量的变化情况及两者相互变化的关系。【方法】选取孕妇60例,分为口服乳酸杆菌组、产后阴道给药组、空白对照组。口服乳酸杆菌组含30例孕妇,产后阴道给药组和空白对照组,每组各15例孕妇。口服乳酸杆菌组孕妇自孕28周至孕30周首次行阴道分泌物检查后开始口服乳酸杆菌制剂至顺产分娩及产后;产后阴道给药组孕妇自孕28周至孕30周行首次阴道分泌物检查后,妊娠期间不给予任何干预至顺产分娩,产后给予乳酸杆菌制剂阴道给药;空白对照组孕妇自孕28周至孕30周行首次阴道分泌物检查后,妊娠期及产后均不给予任何干预;三组孕妇均于服药后至顺产分娩及产后定时检测阴道PH值及阴道乳酸杆菌含量。【结果】(1)三组孕妇不同孕期阴道PH值的变化:口服乳酸杆菌组服药后阴道PH值明显下降,晚孕前期至晚孕后期明显下降(PH=3.677 VS PH=3.511),晚孕后期至产后阴道PH值升高(PH=3.511 VS PH=3.670)。整个妊娠期阴道PH值在服药前最高,孕38周最低。其余两组各孕期阴道PH值均变化不显著。(2)三组孕妇不同孕期阴道乳酸杆菌含量的变化:口服乳酸杆菌组阴道乳酸杆菌含量从服药后至晚孕后期明显升高(4.867x10~7 VS 6.761x10~7),晚孕后期至产后下降(6.761x10~7 VS 6.283x10~7)。整个妊娠期阴道乳酸杆菌含量在孕38周最高,孕32周最低。其余两组阴道乳酸杆菌含量随着孕周的递增而下降,各孕期变化无显著性差异。(3)三组孕妇阴道PH值与乳酸杆菌的相互变化关系:口服乳酸杆菌组阴道PH值与阴道乳酸杆菌含量呈负相关(r=-0.242,P=0.008),产后阴道给药组产后阴道PH值与阴道乳酸杆菌含量无显著相关(r=0.137,P=0.627)。【结论】妊娠期口服补充乳酸杆菌后,随着孕期的推进,阴道乳酸杆菌含量增加,阴道PH值下降,有助于维持妊娠期正常的阴道微生态。