目的:生长板是位于长骨远端骺与干骺端之间的一层高度器官化的透明软骨。在组织学上根据软骨细胞的不同的分化阶段,可以将生长板分为不同的水平区带,即:静止软骨细胞带、增殖软骨细胞带和肥大软骨细胞带。本研究通过对正常大鼠胫骨标本进行石蜡包埋、切片后分别应用常规HE染色法、Masson三色法、AB-PAS染色法、甲苯胺蓝染色法、藏花红染色法、AZAN染色法、VG染色法、Mallory三色法、番红染色法、固绿染色法、番红-固绿染色法进行染色,比较上述多种组织学染色方法在正常大鼠胫骨生长板组织切片中的染色规律,探讨不同组织化学染色方法在生长板组织形态学研究中的应用。方法:对正常生长发育期大鼠胫骨标本固定、脱钙后进行石蜡包埋和切片。切片脱蜡至水后分别进行(1)常规HE染色:入苏木精染液5分钟;自来水洗1分钟;入1%盐酸酒精分色数秒;自来水洗1分钟;入1%的伊红3分钟;自来水洗1分钟;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。(2)Masson三色法(苯胺蓝复染)染色:入A液5分钟;0.2%醋酸稍洗;入5%磷钨酸5-10分钟;0.2%醋酸洗2次;入B液5分钟;0.2%醋酸洗2次;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。Masson三色法(亮绿复染)染色:入A液5分钟;0.2%醋酸稍洗;入5%磷钨酸5-10分钟;0.2%醋酸洗2次;入B液5分钟;0.2%醋酸洗2次;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。(3)AB(阿尔辛蓝)-PAS(过碘酸-Schiff)染色:蒸馏水浸洗1分钟;入3%醋酸液中3分钟;入阿尔新兰液中30分钟;入3%醋酸液3分钟;蒸馏水冲洗多次;入过碘酸氧化10分钟;自来水冲洗;蒸馏水浸洗2次;在Schiff试剂中染色10-20分钟(据室温);流水冲洗2-5分钟,蒸馏水洗片刻;用Harris苏木精液淡染核;0.5%盐酸乙醇分化数秒钟;蒸馏水洗多次;95%及无水乙醇脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。(4)甲苯胺蓝染色:入甲苯胺蓝溶液30分钟;水洗1分钟;入冰醋酸溶液中于显微镜下分色数秒;蒸馏水洗2次,各2分钟;自然风干;二甲苯透明;中性树胶封片。(5)藏花红染色:入0.1%的藏花红溶液染色2-3分钟;镜下分化数秒;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。(6)“AZAN”三色法染色:入偶氮卡红液4-8小时,37度染色;切片冷却后入蒸馏水漂洗;于1 %苯胺的95%酒精液分色至淡红色;0.5%磷钨酸水溶液媒染3-5分钟;入苯胺蓝-橘黄G染液0.5-1小时;滤纸沾干后在95%酒精分色1/2-1分钟梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。(7)Van Gieson染色法染色:入Weigert氏铁苏木素溶液5-10min;自来水充分洗;入Van Gieson氏液染30s-1min;95%酒精分化数秒;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。(8)Mallory一步三色法染色:重铬酸钾液10分钟;流水冲洗2分钟;蒸馏水两次;酸性复红液2分钟;蒸馏水稍洗;苯胺蓝液20分钟;95%乙醇快速分化;直接无水乙醇脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。(9)番红染色:在1%番红染液中浸染3分钟;镜下95%酒精分化数秒;风干;二甲苯透明;中性树胶封片。(10)固绿染色:于1%固绿染液中浸染3分钟;镜下95%酒精迅速分化;风干;二甲苯透明;中性树胶封片。(11)番红-固绿染色:于1%番红染液中浸染3分钟;入1%固绿复染3分钟;95%酒精分化数秒;复加番红染色2分钟;镜下95%酒精分化数秒;风干;二甲苯透明;中性树胶封片。在OLIMPUS显微镜下观察经上述染色后的切片上的生长板组织,并进行图像采集,比较上述组织学染色方法在正常大鼠胫骨生长板组织切片中的染色规律。结果:(1)常规HE染色:软骨组织呈蓝染,可见不同区带的软骨细胞,软骨陷窝不着色,成熟的骨小梁被染成粉红色。(2)Masson三色染色(苯胺蓝复染):软骨组织呈淡蓝色,可见不着色的骨陷窝以及不同区带的软骨细胞。骨小梁外形不规则或呈鹿角状,随着骨小梁趋于成熟,部分骨小梁中间的颜色呈红色,成熟的骨小梁呈深蓝色。骨样基质到成熟骨的染色规律为淡蓝色到深蓝色。纤维组织呈蓝色条纹状或边缘光滑团块状,中间无骨母细胞和骨陷窝。Masson三色染色(亮绿复染):软骨组织呈淡绿色,骨陷窝不着色,可见不同区带的软骨细胞。可见外形呈鹿角状的骨小梁,随着骨小梁趋于成熟,部分骨小梁中间的颜色呈红色,成熟的骨小梁呈深绿色。骨样基质到成熟骨的染色规律为淡绿色到深绿色。(3)AB-PAS染色:软骨组织呈深浅不一的蓝色,可见软骨细胞呈柱状排列,从软骨细胞静止带到肥大带蓝色渐浅,骨化中心的骨组织呈红染。生长板与周围组织界限清楚。(4)甲苯胺蓝染色:软骨组织基质呈均匀的淡紫蓝色,隐约可见呈柱状排列的软骨细胞,细胞核被染成紫色。(5)藏花红染色:软骨组织呈深浅不一的橘色,从软骨细胞静止带到肥大带染色渐浅,骨小梁被染成粉红色。软骨组织与骨组织染色后差异明显。(6)“AZAN”三色法:软骨组织呈淡蓝色,可见柱状排列的软骨细胞,生长板各区带染色均较浅,骨小梁呈蓝色,骨小梁之间可见橘红色的红细胞。(7)Van Gieson染色法:软骨组织呈淡红色,软骨细胞核呈灰黑色。骨小梁形状不规则,呈红染,其间可见棕黄色的红细胞。软骨组织与骨组织界限分明。(8)Mallory三色法:软骨组织及骨小梁为蓝染,深浅不一,骨小梁染色最深。软骨细胞核呈红色,骨小梁间红细胞呈橘黄色。(9)番红染色:软骨组织及骨小梁呈深浅不一的粉红色,从软骨细胞静止带到肥大带染色渐浅,骨小梁染色最浅。(10)固绿染色:骨小梁呈淡染的绿色,软骨细胞及其基质不着色。(11)番红-固绿染色:软骨组织呈深浅不一的粉红色,从软骨细胞静止带到肥大带染色渐浅。骨小梁呈绿色,其间红细胞被染成绿色。软骨组织与骨组织对比鲜明。结论:在生长板组织学研究中,AB-PAS染色法、VG染色法、番红-固绿染色法能较好的将不同成熟度的软骨组织和骨组织显示出来,优于其他方法,可用于骨发育的研究中。