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目的:检测趋化性细胞因子Fractalkine(FKN)及其受体CX3CR1在子宫内膜异位症患者(EMs)在位内膜、异位内膜及腹腔液和血清中的表达,并对腹腔液细胞进行液基细胞学和免疫细胞化学检测,进一步了解FKN和CX3CR1在子宫内膜异位症发生、发展过程中所发挥的作用,为指导临床诊断和治疗提供理论依据。方法:1研究对象1.1实验组:选自2007年6月—2008年10月间在我院住院行腹腔镜或开腹手术并经病理证实的EMs患者为研究对象。分为内膜组、腹腔液组、血清组及腹腔液细胞组。内膜组60例,其中异位内膜及在位内膜分别为30例(增生期16例、分泌期14例),患者的在中位数年龄35岁(22~43岁)。腹腔液组和血清组患者分别24例(增生期12例、分泌期12例),患者的中位数年龄27.5岁(21~35岁)。腹腔液细胞组30例(增生期15例、分泌期15例),患者的中位数年龄25.5岁(21~34岁)。1.2对照组:选取我院同期因不孕症行腹腔镜检查同时刮宫送病理的患者(刮取的子宫内膜均经病理证实为正常的子宫内膜)为对照组,分为内膜组、腹腔液组、血清组及腹腔液细胞组。正常内膜组20例(增生期11例、分泌期9例),患者的在中位数年龄29.5岁(24~36岁)。腹腔液组和血清组患者分别20例(增生期10例、分泌期10例),患者的中位数年龄30.5岁(21~37岁)。腹腔液细胞组20例(增生期10例、分泌期10例),患者的中位数年龄28岁(21~37岁)各组患者年龄无差异;所有病例均经组织学证实;月经周期正常,周期划分根据末次月经及子宫内膜病理结果证实;无内分泌、免疫及代谢性疾病;术前6个月无甾体类激素治疗史;近6个月无内异症治疗史及IUD置入史;患者本身无高血压、心脏病、糖尿病、肾病等内科疾病,无急慢性盆腔炎史及其他病史。2标本采集2.1内膜组:术中分别取异位内膜、在位内膜或正常内膜组织经生理盐水反复冲洗后,10%福尔马林固定。2.2腹腔液组:腹腔镜检查明确后,在子宫直肠陷凹处吸取约3ml腹腔液,置于无菌离心试管中,常温下以3000r/min离心10min后吸取上清液,做好标记,储存于-70℃低温冰箱中备用。2.3血清组:各组患者均于术前空腹抽取肘静脉血3ml,离心,取上清液,做好标记,储存于-70℃低温冰箱中备用。2.4腹腔液细胞组:腹腔液离心后取沉淀,使用新柏氏处理液去除血液及黏液等杂质,置入新柏氏保存液中待测。3试验方法:采用免疫组化的方法对FKN及CX3CR1在内膜组中的表达进行测定;采用ELISA的方法对FKN及CX3CR1在腹腔液及血清中的表达进行测定;使用液基细胞技术制片,采用免疫细胞化学染色法对腹腔液细胞中FKN及CX3CR1的表达进行测定。结果:1 FKN的表达主要定位于异位(Fig.1)和在位内膜(Fig.2)的腺体上皮细胞、间质细胞和血管内皮细胞的胞浆和胞膜上,内膜腺体腺腔表面可见较多FKN阳性颗粒。正常子宫内膜组织(Fig.3)中无表达或仅有少量阳性颗粒。CX3CR1主要弥漫表达于异位(Fig.4)和在位内膜(Fig.5)组织的间质细胞胞浆和胞膜上,腺体临腺腔表面偶可见CX3CR1的阳性颗粒。正常子宫内膜组织中(Fig.6)无表达或仅有少量阳性颗粒。2 FKN及其受体CX3CR1在异位内膜组、在位内膜组、正常内膜组中的表达(Tab.1 Tab.2)FKN在异位内膜组、在位内膜组、正常内膜组中的阳性表达率分别为93.33%、70.00%、15.00%。FKN在异位内膜组和在位内膜组中的表达显著高于正常内膜组(X2=31.99,P<0.01; X2=15.15,P<0.01); FKN在异位内膜组中的表达显著高于在位内膜组(X2=16.49,P<0.01);FKN在异位内膜组、在位内膜组和正常内膜的不同月经周期中的表达均无显著性差异(P>0.05)。CX3CR1在异位内膜组、在位内膜组、正常内膜组中的阳性表达率分别为86.67%、63.33%、25.00%。CX3CR1在异位内膜组和在位内膜组中的表达显著高于正常内膜组(X2=23.37,P<0.01; X2=8.26,P<0.05); CX3CR1在异位内膜组中的表达显著高于在位内膜组(X2=21.97,P<0.01);FKN在在位内膜组和正常内膜的不同月经周期中的表达均无显著性差异(P>0.05)。FKN和CX3CR1在异位内膜组、在位内膜组、正常内膜组中的表达均存在相关性,相关系数分别为r=0.65, P<0.01; r=0.63, P<0.05; r=0.62, P<0.05。3 FKN及其受体CX3CR1在腹腔液和血清中的表达(Tab.3)FKN在病例组和对照组的腹腔液中的含量分别为2438.50±662.70 pg/ml、1396.03±677.09pg/ml,病例组的含量明显高于对照组(P<0.05); FKN在病例组和对照组的血清中的含量分别为2671.56±1156.63pg/ml、3411.06±864.02pg/ml,两组在血清中含量差别无显著性(P>0.05);FKN在腹腔液和血清中的病例组、对照组的增生期和分泌期相比较,差别无统计学意义(P>0.05)。CX3CR1在病例组和对照组的腹腔液中的含量分别为20.40±8.30 ng/ml、7.04±3.849ng/ml,病例组的含量明显高于对照组(P<0.05);CX3CR1在病例组和对照组的血清中的含量分别为32.14±12.29ng/ml、31.16±12.21ng/ml,两组在血清中含量差别无显著性(P>0.05);CX3CR1在腹腔液和血清中的病例组、对照组的增生期和分泌期相比较,差别无统计学意义(P>0.05)。4 FKN (Fig.7)主要表达于腹腔液中的单核巨噬细胞、腹膜间皮细胞的胞浆和胞膜上。CX3CR1(Fig.9)主要表达于腹腔液单核巨噬细胞、NK细胞、淋巴细胞的胞浆和胞膜上。5 FKN、CX3CR1在腹腔液细胞中的表达(Tab.4 Tab.5)FKN在病例组和对照组中的表达阳性率分别为100%、75.00%,病例组的表达显著高于对照组(X2=26.53,P<0.01);病例组、对照组中增殖期和分泌期相比,无显著性差异(p>0.05)。CX3CR1在病例组和对照组中的表达阳性率分别为96.67%、90.00%,病例组的表达显著高于对照组(X2=26.85,P<0.01);病例组、对照组中增殖期和分泌期相比,无显著性差异(p>0.05)。病例组和对照组FKN和CX3CR1的表达存在相关性,相关系数分别为r=0.54, P<0.05; r=0.69, P<0.05。结论:1在正常内膜、在位内膜、异位内膜中FKN和CX3CR1的表达水平有增高的趋势,说明两者在EMs形成中发挥着重要作用。2在病例组的腹腔液中FKN和CX3CR1的含量均高于对照组,表明两者参与内异症患者腹腔内环境的改变,并促进异位内膜的粘附、种植和异位灶血管的形成。3 FKN和CX3CR1是反应EMs侵袭生长的有效指标,但血清中FKN和CX3CR1在病例组和对照组中的含量无显著性差异,表明两者不参与EMs患者全身的免疫失调。4 FKN和CX3CR1在内膜组和腹腔液细胞组中的表达均与月经周期无关。5 FKN和CX3CR1在内膜组和腹腔液细胞组中的表达均有相关性,说明两者相互作用,共同促进了EMs的发展。6统计分析表明FKN和CX3CR1在EMs患者内膜、腹腔液、腹腔液细胞中的表达均高于对照组,两者在EMs的发生、发展中发挥着重要的作用。对FKN和CX3CR1的研究为EMs的治疗提供了新的途径。