脑胶质瘤是成人中枢神经系统中最常见的原发性恶性肿瘤,占颅内肿瘤的比例超过40%,而且其中高级别胶质瘤所占比例较高。目前胶质瘤的治疗以手术切除为主,辅以放、化疗。尽管近些年来胶质瘤的治疗手段取得了一定的进步,但恶性胶质瘤患者的预后并没有达到理想的效果,因此,恶性胶质瘤仍被视为人类在肿瘤的治疗方面没有取得显著进展的肿瘤之一。毫无疑问,肿瘤的发生、发展是一个多因素的过程。随着对肿瘤研究的深入,人们开始从基因层面去揭开肿瘤的发生、发展机理。因此,探索胶质瘤发生、发展的分子机制,也成为目前胶质瘤研究的热点。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是一类转录本超过200个核苷酸,并且不编码蛋白的RNA。起初,它被视为是基因转录中的“噪音”,不具有生物学功能。然而,近些年来的研究表明,长链非编码RNA在基因表达的调控以及表观遗传学等方面具有重要的作用,能够在多个层面参与细胞分化和个体发育的过程,并与很多疾病的发生、发展密切相关。尽管长链非编码RNA在肿瘤中的研究取得了一定的成果,但是绝大多数的lnc RNA作用机制仍不清楚。因而,这也是今后基础研究的一个重要方向。我们利用前期芯片数据发现了一个在胶质瘤中异常表达的长链非编码RNA HOXC-AS1,目前没有发现关于其在肿瘤研究中的相关报道,因此,这也成为我们兴趣所在。本研究首先明确长链非编码RNA HOXC-AS1在不同级别胶质瘤组织中的表达情况,结合患者临床指标及其预后情况,统计学分析其相关性。紧接着,我们根据HOXC-AS1的基因设计干扰靶点,并利用体外功能实验,研究下调HOXC-AS1后胶质瘤细胞的细胞生物学行为变化。然后,利用实验筛选出HOXC-AS1靶基因HOXC8,初步探索HOXC-AS1的可能作用机制。实验共分为三个部分:第一部分,长链非编码RNA HOXC-AS1在脑胶质瘤中表达研究;第二部分,下调HOXC-AS1后对胶质瘤细胞系U251和A172的生物学行为影响研究。第三部分,HOXC-AS1的靶基因筛选及初步机制研究。第一部分长链非编码RNA HOXC-AS1在脑胶质瘤中的表达研究目的:初步研究长链非编码RNA HOXC-AS1在脑胶质瘤和正常脑组织中的相对表达情况。结合患者临床指标,分析长链非编码RNA HOXC-AS1表达水平与患者各种临床指标间的相关性。方法:采用qRT-PCR方法检测HOXC-AS1在不同级别胶质瘤组织以及正常脑组织中的表达情况,利用统计学分析HOXC-AS1的表达水平与各种临床指标间的相关性。并利用Kaplan-Meier生存分析HOXC-AS1的相对表达水平与胶质瘤患者预后的相关性。结果:利用q RT-PCR实验检测不同级别胶质瘤和正常脑组织HOXC-AS1相对表达水平,结果显示,HOXC-AS1在高级别胶质瘤中的相对表达量明显高于低级别胶质瘤和正常脑组织。结合患者各种临床指标,结果显示HOXC-AS1表达水平与胶质瘤的级别呈正相关。同时,利用Kaplan-Meier生存分析HOXC-AS1的相对表达水平与患者总生存时间呈负相关。结论:HOXC-AS1在不同级别胶质瘤组织标本中的相对表达水平与胶质瘤级别呈正相关。HOXC-AS1的相对表达水平与胶质瘤患者预后呈负相关。第二部分:下调HOXC-AS1后对胶质瘤细胞系U251和A172的生物学行为影响研究目的:初步研究HOXC-AS1在胶质瘤细胞系中的功能作用方法:设计合成HOXC-AS1的干扰序列,利用Lipofectamine 3000转染胶质瘤细胞系,观察敲减HOXC-AS1胶质瘤细胞系后胶质瘤细胞的一系列体外功能变化情况。结果:将干扰RNA转染胶质瘤细胞系U251和A172后,q RT-PCR结果显示HOXC-AS1的表达量明显下降。利用WST-1实验检测细胞增殖能力,发现敲减HOXC-AS1后胶质瘤细胞的增殖能力下降;Transwell实验显示敲减HOXC-AS1后胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力下降;流式细胞术结果显示敲减HOXC-AS1后胶质瘤细胞的凋亡比例增加,细胞周期以及周期相关蛋白出现改变。结论:HOXC-AS1能够促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭与迁移能力,并且抑制胶质瘤细胞的凋亡。第三部分,HOXC-AS1的靶基因HOXC8筛选及初步机制研究目的:研究HOXC-AS1与HOXC8在胶质瘤组织样本中表达相关性,初步探索HOXC-AS1在胶质瘤中可能通过靶基因HOXC8的作用机制。方法:利用q RT-PCR实验首先检测敲减HOXC-AS1后HOXC家族中各基因的表达变化情况,再检测HOXC8不同级别胶质瘤组织以及正常脑组织中的表达情况,采用皮尔森相关性分析法检测HOXC-AS1和HOXC8在胶质瘤组织标本中表达量的相关性。利用Western blot和免疫组织化学技术检测HOXC8在组织标本中的表达情况。利用体外功能实验,观察在细胞系中敲减HOXC-AS1后HOXC8在蛋白水平的变化情况。结果:q RT-PCR实验表明敲减HOXC-AS1后HOXC8表达量下降,皮尔逊相关性分析表明HOXC-AS1与HOXC8在不同级别胶质瘤样本中表达正相关,Western blot和免疫组化结果显示HOXC8表达水平与胶质瘤级别呈正相关。Western blot实验结果还表明敲减HOXC-AS1后能够抑制HOXC8的表达水平。结论:HOXC-AS1可能通过调控HOXC8的表达在胶质瘤细胞中发挥促癌作用。