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本试验探讨了基本培养基、植物生长调节剂、培养条件、接种方式、碳源等因素对铁皮石斛拟原球茎的诱导和增殖、分化培养的影响以及培养基成分、培养条件等对拟原球茎中的药用有效成分,如石斛多糖、总生物碱等的积累的影响进行了研究,研究结果如下: 1.通过比较MS、LS、B5、N6、H、Nitsch、White和WPM8种基本培养基对铁皮石斛拟原球茎的诱导、增殖、分化和试管苗壮苗生根的影响,发现N6培养基适合于铁皮石斛拟原球茎诱导和增殖,B5培养基适合拟原球茎的分化培养和试管苗的壮苗生根。 2.2,4-D、NAA和IBA三种生长素均可诱导出拟原球茎,诱导率都在65%以上,其中以0.5 mg/L2,4-D,0.5-1.0 mg/L NAA,1.0mg/L IBA效果最好。2,4-D和6-BA,以及2,4-D和KT结合使用均不利于拟原球茎诱导和增殖。1.0mg/LNAA+0.3-0.5 mg/L6-BA、1.0mg/L IBA+0.5 mg/L6-BA诱导出的拟原球茎生长旺盛,富有光泽,有利于进一步继代培养。 在诱导拟原球茎的分化培养中,单独使用NAA时,以0.5 mg/L效果最好。如果把NAA与细胞分裂素配合使用,以0.5mg/L NAA+0.5mg/L6-BA的组合最有利于拟原球茎的分化,并且拟原球茎生长量明显大于单独使用NAA时的生长量。高浓度NAA和高浓度的6-BA配合使用则会对拟原球茎的分化产生抑制作用。 在试管苗壮苗生根培养中,单独使用IBA时,以1.0 mg/L效果最好。如果把IBA与NAA配合使用,以0.3mg/L NAA+1.0mg/L6-BA的组合最有利于试管苗的壮苗和生根。 3.拟原球茎诱导和增殖pH值以5.8比较适宜;培养过程中的光照条件以12h光照加12h黑暗有利于拟原球茎诱导和增殖;接种时将长度为0.7cm的茎段横放时诱导效果最好。 4.碳源对比表明,分析纯的蔗糖比葡萄糖和市售普通白糖更有利于拟原球茎诱导和增殖。当蔗糖浓度为40mg/L时不仅有利于拟原球茎的增长,也有利于石斛多糖的积累。 5.系统研究了B5培养基中大量元素、微量元素、蔗糖浓度对铁皮石斛试管