禽传染性喉气管炎（Infectious Laryngotracheitis，ILT）是鸡的一种以呼吸困难、咳出血样黏液、喉部和气管黏膜水肿出血并导致糜烂为主要特征的病毒性呼吸道传染病，可致感染鸡的死亡和产蛋下降，是危害养禽业的重要疫病之一。传染性喉气管炎病毒（ILTV）野毒和弱毒疫苗都可以造成潜伏感染，成为传染源，使本病持续存在，并形成区域流行。本研究通过表达ILTV三个重要结构蛋白并纯化和建立间接ELISA方法，以筛选合适的诊断抗原并建立间接ELlSA方法，用于ILTV野毒感染的血清学检测。本研究首先克隆和测序了ILTV WG株gJ基因，gJ完整开放阅读框大小为2988bp，比ILTVUSDA株多30bp，推测编码的氨基酸序列单独形成一个表位。随后，通过PCR扩增出ILTV三重要囊膜糖蛋白gD、gE和gJ的主要抗原性区域，连接到原核表达载体pET-32a（+）中，经IPTG诱导在E．coli BL21（DE3）中表达，三重组蛋白r-gD、r-gE和r-gJ都有可溶性蛋白存于上清中，经His单克隆抗体鉴定后，非变性条件下用Ni树脂纯化r-gD、r-gE和r-gJ，ILTV阳性血清和制备的兔抗r-gD、r-gE、r-gJ单因子血清证实r-gD、r-gE和r-gJ都保留了抗原性。然后，对纯化的r-gD、r-gE和r-gJ进行了间接ELISA条件的探索，优化抗原浓度，血清稀释度，酶标二抗稀释倍数和封闭液；根据36份SPF阴性血清，按阴阳性临界值=阴性血清OD₄₀₅平均值+3×SD，确立了r-gD、r-gE和r-gJ间接ELISA判定标准；完成了特异性试验和符合性试验，r-gD、r-gE和r-gJ间接ELISA对139份血清样品的检测结果与全病毒间接ELISA的符合率分别为92.8％、77.0％和77.0％；对试验感染ILTV WG株的SPF鸡血清进行检测，r-gD、r-gE和r-gJ间接ELISA都能检测出明显的抗体变化曲线，其中r-gD间接ELISA能够更合理的反映ILTV感染后机体的体液免疫状况。根据试验结果，我们选择r-gD为ILTV野毒感染的血清抗体检测ELISA抗原，并确立了间接ELISA方法。本研究筛选r-gD为ELISA抗原，确立间接ELISA方法，为ILTV野毒感染与弱毒疫苗免疫的血清检测提供基础。