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第一部分 人IFN-λ<,1>基因的克隆 目的 探索获取IFN-λ<,1>基因克隆的方法.方法 从经滤疱性口腔炎病毒(Vesicular stomatits Virus,VSV)诱导过的A549细胞中抽取总RNA,再用一对特异性引物进行RT-PCR(Reverse transcribed polymerase chain reaction),以扩增出足够数量的IFN-λ<,1>基因片段,再经PCR回收试剂盒进行回收.结论 成功克隆到了IFN-λ<,1>基因.第二部分 人IFN-λ<,1>真核表达载体pcDNA3.1A—IFN-λ<,1>的构建 目的 探索构建IFN-λ<,1>真核表达载体的途径.方法 用EcoRⅠ和BamHⅠ二种限制性内切酶对经PCR获取的IFN-λ<,1>基因和pcDNA3.1A质粒分别进行双酶切,再经T<,4>连接酶连接后,将基因重组质粒在感受态的大肠杆菌DH5α中进行转化后涂平板.结论 成功构建了重组质粒pcDNA3.1A—IFN-λ<,1>的真核表达载体.第三部分 pcDNA3.1A—IFN-λ<,1>在COS-7细胞中的表达及抗病毒活性的研究 目的 将人IFN-λ<,1>基因转染COS-7细胞后,检测培养上清液中所表达的IFN-λ<,1>的抗病毒生物学活性.方法 采用脂质体介导的真核细胞基因转染法,48小时后收集转染细胞上清液并进行抗病毒活性的研究,与此同时对实验组和阴性对照组的COS-7细胞进行RT-PCR,以判断人IFN-λ<,1>基因是否已转入细胞内和进行了有效表达.结论 人IFN-λ<,1>基因已转入COS-7细胞内,并表达、分泌了具抗病毒活性的IFN-λ<,1>.