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目的:基于受体-配体(receptor-ligand)间相互特异性识别原理,借助化学生物学偶联的手段,设计、合成具有CD22靶向功能的荧光纳米材料,表征荧光纳米材料的材料性质,并通过细胞靶向实验实现CD22高表达的细胞系的示踪,为CD22的生物学诊断提供有力工具。方法:1.基于receptor-ligand相互识别原理,借助N-乙酰神经氨酸(NANA)对CD22的识别作用,对其进行衍生化处理,得到不稳定的O-酰基异基酯(NANA-EDC),用于氨基量子点(NH2-QDs)的生物偶联;将NANA-EDC与NH2-QDs进行偶联,得到NANA-QDs纳米复合物。2.对NANA-QDs纳米复合物的材料性质进行表征,通过测定NANA-QDs纳米复合物中配体NANA的偶联度,粒径分布,Zeta电位,量子产率,光谱学性质,生物毒性等性质,明确NANA-QDs纳米复合物的结构,荧光性能和安全性。3.借助体外细胞实验对NANA-QDs纳米复合物的靶向性能进行评价,通过模式CD22高表达细胞株Daudi表面荧光分布、竞争性结合实验、纳米粒子细胞内吞实验、免疫荧光共定位等实验确定NANA-QDs特异性和亲和性。4.将NANA-QDs纳米复合物用于多种肿瘤细胞的CD22表达水平检测,并通过传统方法蛋白质免疫印迹(Western blotting analysis)、流式细胞术、细胞免疫荧光对结果可靠性进行验证。结果:经TEM及DLS测试,结果表明NANA-QDs纳米复合物的平均粒径分布为10nm左右且分布均匀;平均偶联度为1分子QD纳米粒子表面可偶联294个NANA分子,配体分子浓度较高,有利于下一步细胞靶向实验;偶联后,量子产率稳定,保持在70%左右,且荧光光谱谱峰对称,荧光性能良好;在细胞靶向性测试中,NANA-QDs纳米粒子在Daudi细胞表面产生强烈的红色荧光信号,初期荧光信号具有类似细胞膜结构分布,而阴性对照中荧光微弱且无特异性分布;通过与游离NANA的竞争性结合及免疫荧光共定位实验表明,NANA-QDs纳米复合物与Daudi细胞的结合是NANA上环状结构对CD22的特异性识别产生;纳米粒子细胞动力学实验表明,随着时间延长,荧光分布逐渐由Daudi细胞表面进入细胞内部,表明NANA-QDs可通过细胞的CD22内吞作用进入细胞;以上一系列实验表明NANA-QDs对细胞表面CD22具有特异性识别及靶向作用。将NANA-QDs纳米粒子用于淋巴瘤、肝癌、肺癌及乳腺癌六种肿瘤细胞CD22表达水平的测定,表明CD22除在淋巴瘤细胞特异性高表达外,在肝癌细胞、肺癌及乳腺癌细胞均呈低表达,在A549细胞中CD22的表达随传代次数的增加呈现上调趋势;利用细胞免疫荧光、流式细胞术和Westerning blotting等传统鉴定手段验证了上述实验结果的可靠性。结论:本研究利用NANA环状结构特异性识别CD22受体的原理,制备了NANA-QDs纳米荧光材料,其粒径分布均匀,荧光性能良好,低生物毒性,对细胞表面跨膜糖蛋白CD22具有较强的靶向性,为CD22的生物学诊断提供了有力工具。