第一部分人腹主动脉瘤病变组织中IL-17A, RORyt蛋白表达的研究目的通过收集腹主动脉瘤患者病变组织标本与正常腹主动脉组织标本,研究IL-17A、RORyt的蛋白表达差异,为实验性腹主动脉瘤模型的研究提供依据。方法收取人腹主动脉瘤病变组织标本以及人正常腹主动脉组织标本各10例,分别分成腹主动脉瘤组(Abdominal Aortic Aneurysm, AAA以及对照组(Control组),对两组标本分别进行组织学以及Western Blot方法研究。通过弹性纤维EVG染色、免疫组化(CD4、Mac2、CD31、α-SM actin)染色研究腹主动脉瘤的病理学改变。通过Western Blot法对两组标本的1L-17A以及RORyt的蛋白表达进行研究。结果组织学研究表明腹主动脉瘤病变组织中发生了明显的弹性纤维断裂、降解,中层平滑肌细胞凋亡,外膜新生毛细血管增生,管壁炎性细胞(CD4+T细胞,Mac2+巨噬细胞)浸润。同时,Western Blot分析表明AAA组中1L-17A、RORyt的蛋白表达较Control组明显增加,两者差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论目前关于IL-17A在腹主动脉瘤瘤中的作用是不明确的,我们通过研究结果表明IL-17A、RORyt蛋白水平的表达在腹主动脉瘤组织中明显增高,炎性细胞大量浸润,推测IL-17A对腹主动脉瘤的发生发展可能起到促进作用,为后续动物实验的开展提供了理论依据。第二部分地高辛对血管紧张素II诱导的ApoE-/-小鼠实验性腹主动脉瘤模型保护作用的研究目的探讨地高辛药物干预对血管紧张素II诱导的ApoE-/-小鼠实验性腹主动脉瘤模型的作用及其机制。方法常规建立血管紧张素II经Alzet微量渗透泵皮下置入法诱导的ApoE-/-小鼠实验性腹主动脉瘤模型。80只16周龄的雄性ApoE-小鼠随机分为假手术组(Sham组)、对照组(Control组)、低剂量地高辛干预组(Low-dose组)、高剂量地高辛干预组(High-dose组),每组均20只实验鼠。其中Sham组由生理盐水皮下微量泵入并给予同等量的0.5%DMSO溶液腹腔注射治疗；Control组由血管紧张素Ⅱ皮下微量泵入并给予同等量的0.5%DMSO溶液腹腔注射治疗；Low-dose组由血管紧张素Ⅱ皮下微量泵入并给予同等量的0.5%DMSO+Digoxin(20μg/只.天)混合溶液腹腔注射治疗；High-dose组由血管紧张素Ⅱ皮下微量泵入并给予同等量的0.5%DMSO+Digoxin(40μg/只.天)混合溶液腹腔注射治疗。各组小鼠分别于术后第0、7、14、21以及28天对小鼠进行腹主动脉直径超声测量,评估腹主动脉瘤形成情况。术后第0、28天采用尾夹测压法测量小鼠收缩压,评估血管紧张素II对血压的影响。术后第28天收取小鼠腹主动脉,进行HE、EVG、免疫组化(α-SM actin、CD31、CD4以及Mac2)、免疫荧光染色(anti-CD4、IL-17A)等组织学分析、小鼠脾细胞流式细胞仪分析、Western blot蛋白检测炎性相关蛋白(IL-17A,、RORγt、MCP-1、IFN-γ、RANTES以及MMP-2、MMP-9)的表达。结果(1)与对照组相比,高剂量地高辛干预显著的降低了腹主动脉瘤的形成率(35%vs70%,P<0.05)并且提高了小鼠存活率。(2)地高辛干预对术后第28天的小鼠血压并无明显影响。(3)与对照组比较,高剂量地高辛干预明显地保护了血管壁结构。(4)与对照组比较,高剂量地高辛干预明显地减轻了腹主动脉组织中炎性细胞(CD4+T细胞,巨噬细胞)的浸润。(5)与对照组比较,高剂量地高辛干预明显地抑制了促炎因子及MMPs的蛋白表达。(6)与对照组比较,高剂量地高辛干预改变了小鼠脾细胞中Th17细胞、调节性T细胞的组成。结论地高辛干预(尤其是高剂量干预)可以有效的抑制炎性因子的表达以及炎性细胞浸润,有效地保护血管正常组织,减缓实验性腹主动脉瘤的发展。第三部分地高辛对猪胰弹性蛋白酶诱导的C57BL/6J小鼠实验性腹主动脉瘤模型保护作用的研究目的探讨地高辛干预对另一种由猪胰弹性蛋白酶诱导的C57BL/6J小鼠实验性腹主动脉瘤模型的作用及其机制。方法建立了改良的猪胰弹性蛋白酶诱导的C57BL/6J小鼠实验性腹主动脉瘤模型。42只10周龄的雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham组,生理盐水灌注+0.5%DMSO溶液腹腔注射治疗,100mmHg灌注压,5min, n=12),对照组(Control组)、地高辛干预组(n=15/组)。其中Sham组采用生理盐水5min+0.5%DMSO溶液腹腔注射治疗(n=12); Control组采用4U/ml的PPE溶液lOOmmHg灌注压灌注5min+0.5%DMSO溶液腹腔注射治疗(n=15)；Digoxin组采用4U/ml的PPE溶液100mmHg灌注压灌注5min+Digoxin(40μg/只.天)与0.5%DMSO混合溶液腹腔注射治疗(n=15)。各组小鼠分别于术后第0、7、14天对小鼠进行腹主动脉直径超声测量,评估腹主动脉瘤形成情况。术后第14天收取小鼠腹主动脉,进行EVG、免疫组化(α-SM actin.CD31.CD4以及Mac2)等组织学分析,并进行Western blot蛋白检测炎性相关蛋白(IL-17A,MCP-1,IFN-γ以及MMP-2)的表达。结果(1)与对照组相比,地高辛干预显著的降低了腹主动脉瘤的形成率(33.3%vs71.4%,P<0.05)。(2)与对照组比较,地高辛干预明显地保护了血管壁结构。(3)与对照组比较,地高辛干预明显地减轻了腹主动脉组织中炎性细胞(CD4+T细胞,巨噬细胞)的浸润。(4)与对照组比较,高剂量地高辛干预明显地抑制了促炎因子及MMP-2的蛋白表达。结论地高辛干预由猪胰弹性蛋白酶诱导的C57BL/6J小鼠实验性腹主动脉瘤模型可以有效的抑制炎性因子的表达以及炎性细胞浸润,有效地保护血管正常组织,减缓实验性腹主动脉瘤的发展。