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膀胱肿瘤是泌尿系最常见的肿瘤。90%以上是移行上皮细胞癌,其中80%以上是无浸润的浅表性癌。初次治疗后5年复发率高达50%-90%,其中10%-20%转变成浸润性癌[1]。早期诊断和对复发的早期预测显得极为重要。长期以来,尿细胞学和膀胱镜检一直是膀胱癌的主要检查方法,但前者敏感性太低,后者是有创检查,频繁检查使病人感到十分痛苦。寻找新的瘤标,以早期检测出临床隐匿性膀胱癌并延长膀胱镜检的间隔时间,即寻找特异性和敏感性均佳的瘤标是提高膀胱癌诊断水平,降低死亡率的关键,具有重要的临床价值。浅表性膀胱癌90%分级为G1和G2,其生物学行为差异较大,不同病理专家的病理分级结果相差30%~40%,寻找比较客观的指标指导术后随访和化疗药物/卡介苗膀胱灌注具有重要价值。近年来的研究发现NMP22,CK20,Survivin是有潜力的膀胱癌瘤标。研究认为尿NMP22检测具有较高的敏感性,但也有人持不同意见。应用尿脱落细胞CK20 mRNA的检测诊断膀胱癌存在较大的争议。而应用尿脱落细胞Survivin mRNA的检测诊断膀胱癌仅为初步研究。上述三种膀胱癌瘤标的系统性比较尚缺乏研究。Survivin在浅表性膀胱癌组织中的表达差异能否预测肿瘤的复发尚未见报道。因此,本实验采用前瞻性临床研究的方法,应用ELISA、RT-PCR 等技术,对膀胱癌病人、泌尿系良性疾病病人和健康志愿者进行尿NMP22、尿脱落细胞CK20 mRNA, 尿脱落细胞Survivin mRNA检测和尿细胞学检查,以膀胱镜检+活检为金标准,比较这4种无创检测方法在膀胱癌诊断中的价值。应用免疫组织化学技术,检测膀胱肿瘤组织中的CK20和Survivin蛋白表达,分析CK20和Survivin在浅表性膀胱癌组织中的表达差异,观察表达差异对肿瘤复发的预测价值。通过对泌尿系其他疾病病人常规进行尿NMP22检测,观察NMP22检测的假阳性分布,分析排除干扰因素对提高诊断准确性的价值。观察健康志愿者尿中掺入不同浓度的红细胞对NMP22检测的影响。主要结果:1.尿NMP22检测诊断膀胱癌的敏感性、特异性、阳性、阴性预测值分别为81.9%、<WP=11>61.0%、78.7%、65.8%。其敏感性与肿瘤大小有极显著的相关性。尿脱落细胞CK20mRNA检测分别为86.1%、63.4%、83.8%、72.2%,其敏感性与肿瘤分期有显著的相关性 。尿脱落细胞Survivin mRNA检测分别为83.3%、90.2%、93.8%、75.5% ,与肿瘤分期有显著的相关性。尿细胞学检查分别为31.9%、100%、100%、45.6%。尿NMP22, 尿脱落细胞CK20mRNA、Survivin mRNA检测诊断膀胱癌的敏感性均明显高于尿细胞学检查,特异性低于尿细胞学检查。2. 42例初发的浅表性膀胱癌(病理分级为G1和G2)中10 例为CK20正常表达方式,32例为异常表达方式。随访10-28个月,中位随访时间为17个月。目前已有15例复发,均出现于CK20异常表达方式中。24例Survivin表达阳性,18例Survivin表达为阴性。目前的15例复发病例中,12例为Survivin阳性,3例为Survivin阴性。CK20异常表达和Survivin阳性表达与肿瘤复发相关。3. NMP22假阳性结果主要有在于6种临床情况,即良性炎症或感染状况、泌尿系结石、泌尿道异物、肠道代膀胱、其他泌尿生殖系癌、器械操作。排除上述6种干扰因素后,NMP22特异性和阳性预测值明显升高,分别达到96.2%和95.2%,与排除前比较,差别有极显著性意义。4. 健康志愿者尿中加入全血0.2μL/mL ,2μL/mL后,NMP22值分别为9.5U/mL, 26.7U/mL,与未加入全血标本的NMP22值比较,均有显著性差异。主要结论:1. 尿NMP22、尿脱落细胞CK20mRNA、Survivin mRNA检测的敏感性均明显高于尿细胞学检查。可以替代尿细胞学检查,作为膀胱镜检查的辅助手段。尿NMP22检测方法简便,适用于膀胱癌的筛查。Survivin mRNA检测具有较高的特异性,适用于膀胱癌的临床诊断。2. 膀胱癌组织的Survivin蛋白表达阳性率与肿瘤的病理分级和临床分期相关。Survivin的阳性表达和CK20的异常表达可以预测浅表性膀胱癌的复发。3. 排除泌尿系炎症或感染、结石、异物、肠道代膀胱,其他泌尿生殖系癌和器械操作等干扰因素,可明显提高NMP22检测的特异性和阳性预测值,提高其临床应用价值。4. 红细胞的掺入对NMP22检测有一定的影响。对NMP22检测值进行分析时,应结合尿常规检查结果,排除导致尿中红细胞破坏的理化因素的影响。