论文部分内容阅读
NKT细胞兼备固有性和适应性免疫细胞特性，被脂类或糖脂抗原激活后能迅速产生大量细胞因子，并上调表达细胞毒分子。在调节肿瘤免疫和移植耐受中可能有着重要作用。人NKT细胞T细胞受体库的α链为Vα24 JαQ，与之优势配对的β链为Vβ11，称为Vα24 NKT细胞。本研究拟建立体外诱导扩增Vα24 NKT细胞的方法，探讨特异抗原和细胞因子对扩增的影响；其次评价扩增的Vα24 NKT细胞的特性以及细胞因子对其特性的影响；确定Vα24 NKT细胞体外肿瘤杀伤活性以及对同种反应性T细胞免疫应答的抑制；初步论证Vα24 NKT细胞在人-小鼠异种移植中的作用。 34例外周血或脐带血单个核细胞(mononuclear cells，MNC)在α-半乳糖酰基鞘氨醇(α-galactosylceramide，α-GalCer)以及IL-2、IL-15诱导下培养12d，Vα24NKT细胞扩增343.5(95～2207)倍。其中以脐带血前体细胞来源树突状细胞(dendritic cells，DC)负载α-GalCer诱导脐带血Vα24 NKT细胞扩增221.5(95～501)倍(A1组，n=6)，以成人单核细胞来源DC诱导Vα24 NKT细胞扩增339(168～1263)倍(A2组，n=6)，成人外周血直接添加α-GalCer诱导其中NKT细胞扩增达413.5(101～2207)倍(B组，n=22)。B组效果明显优于A1组(P=0.020)，B组与A2组差异无显著性(P=0.576)，A2组似乎优于A1组，但无统计学意义(P=0.132)。所有34例中16例第二次经α-GalCer刺激，其中7例d20扩增达722～28301倍，其余的在培养过程中凋亡，7例中的2例第三次经α-GalCer刺激继续生长，其余凋亡。 4例脐带血CD34细胞以TPO、IL-3、SCF、Flt3L、G-CSF、IL-2、IL-15、IL-7诱导扩增5周，细胞增长1748.5(826～3558)倍；Vα24NKT细胞比例为6.67％(5.66％～18.6％)。 将3例外周血MNC分别分5组培养12d。α-GalCer组(a组)细胞很快凋亡，α-GalCer+细胞因子(d和e组)扩增效果明显优于单用细胞因子(b和c组)(P=0.002)；α-GalCer+IL-2+IL-15(e组)在所有组中效果最佳(P=0.037)。 将7例外周血MNC标本每例分为若干组，在不同细胞因子组合条件下经