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器官移植给各种组织和器官终末期患者带来了希望,然而,移植排斥反应依然是目前所面临的一项艰巨挑战,诱导移植耐受是目前亟待解决的问题。现有的免疫抑制剂在维持免疫耐受的同时,使病人容易受到感染和罹患恶性肿瘤以及药物相关毒性副作用等缺点.研究显示,MHC-IgG二聚体在体外可以诱导供者特异性的同种T细胞耐受。因此,我们尝试去回答二聚体是否可以抑制排斥反应。为此,我们构建、克隆和表达了HLA-A2-IgG2bFc二聚体。利用重叠PCR将两个不同基因片段连接,插入pcDNA3.1,形成pcDNA3.1HLA-A2β2α1α2murineα3克隆质粒。IgG2bFc片段通过酶切、连接形成表达质粒pcDNA3.1HLA-A2β2α1α2murineα3IgG2bFc转染入J558L细胞。G418抗性筛选单克隆,然后,通过ELISA证实转染是否成功。通过单向MLC的方法检测表达的可溶性二聚体是否能抗抑制排斥反应的能力。我们利用携带有HLA-A2转基因鼠作为供体,携带有HLA-A24转基因鼠作为受体,MLC结果表明CD4+T的增殖显著被二聚体抑制。这和我们预期的结果相悖,我们认为二聚体可能对CD8+T细胞增殖有影响,但是没有检测到其增殖。后续研究还将继续,旨在回答上述问题。肿瘤特异性T细胞在宿主中植入和长期存在是其过继治疗取得效果的先决条件。这就需要过继大量的可长期存在的肿瘤特异性T细胞消除肿瘤细胞。因此,如果我们要对抗癌症,那么就需要开发有效的方法来制备长期存在的肿瘤特异性记忆T细胞。本研究中,我们通过单用或联用Il-21和雷帕霉素,评估其在抑制激活细胞向效应细胞分化的同时保持和扩增有干细胞特性的中枢记忆性T细胞(Tscm)亚群的能力。通过这种方法,Tscm将不断产生肿瘤抗原特异性T细胞来消除肿瘤组织。已有的研究表明Il-21和雷帕霉素具有抑制T细胞分化的能力,所以在实验中被用作激活剂或抑制剂。并且,虽然还存在其他的抑制T细胞分化的试剂,但是我们可以通过Il-21和雷帕霉素更容易取得理想的实验效果。除此之外,目前为止还没有研究证实单独或同时用两者可能的效果。首先我们分离健康志愿者的外周血淋巴细胞,然后与加载了AFP肽的T2细胞在24孔板中共培养,产生T2/AFP特异性T细胞,并以单独或联用的方式加入Il-21和雷帕霉素。处理后1周、2周、3周、4周和6周分别收集细胞,用特异性表面标志CD3, CD8, CD44, and CD62L流式细胞仪检测。6周后通过分析发现单独使用雷帕霉素可以显著抑制Tscm的分化。然而,研究表明联合应用Il-21和雷帕霉素时,在第二周Tscm出现最大程度的自我扩增能力。以上的结果表明联合应用Il-21和雷帕霉素在免疫治疗中的具有重要作用。此外,我们的研究也为肿瘤免疫治疗提供理论和实验参考。