棉铃虫细胞HzAm1的低血清培养优化研究

来源 :武汉化工学院 武汉工程大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaoaiping0322
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昆虫细胞一杆状病毒表达体系给真核生物重组医用蛋白和生物杀虫剂的工业化生产带来了希望。为了提高杆状病毒在昆虫细胞中的复制量或重组蛋白在昆虫细胞中的表达量,传统的方法是在昆虫细胞培养基中添加10%左右的胎牛血清。由于血清成本高、来源少,而且血清成份复杂,还是支原体和其它异源病毒污染的重要来源,给基因工程表达的重组蛋白的下游分离处理发展带来了困难,因此,用这一体系进行大规模的商业化生产还存在着一定的挑战。   本课题从三种商业化的培养基TC-100、IPL-41以及Graces中筛选出最适合棉铃虫细胞HzAml生长的基础培养基TC-100,然后以该培养基为基础,补加一定量的水解乳蛋白以及酵母提取物等,可以将血清用量从常用的10%降至1%,进行棉铃虫细胞HzAml低血清培养的研究。在此基础上,通过将较为廉价的Graces培养基中加入一些如酵母提取物、水解乳蛋白、脂类复合物、氢化可的松、氨基酸以及锌、钼、锰微量元素,对Graces培养基进行改善,在血清为5%的条件下,用于培养棉铃虫细胞HzAml,能达到比在血清浓度为10%的培养基TC-100中培养的更为理想的效果,其最大细胞浓度比TC-100提高了70.2%,比在血清浓度为10%的未改善的Graces中培养的细胞浓度提高了229%。同时,实验中将从蛋黄中提取的脂配制成脂类复合物取代进口的脂类复合物,对棉铃虫细胞HzAml在血清浓度为5%的条件下进行了培养,得到了较为满意的结果,并且最大细胞浓度比Grace’s提高了319.7%。
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