第一部分糖蛋白CD44基因多态性与肝癌遗传易感性研究目的:CD44是一种分布极其广泛,具有高度异质性的单链跨膜糖蛋白粘附分子,在肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、浸润以及转移中发挥着重要的作用。本研究通过检测CD44基因rs8193、rs10836347和rs13347三个位点的基因型及等位基因频率分布情况,探讨CD44基因rs8193、rs10836347和rs13347三个位点的基因多态性与肝癌(HCC)患病风险的相关性。方法:本研究共纳入204例肝癌患者和210例对照者,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术及DNA直接测序法,检测CD44基因rs8193、rs10836347和rs13347三个位点的基因多态性。采用拟和优度χ2检验分析各SNP位点在肝癌组和对照组中基因型频率的分布是否符合哈-温平衡(Hardy-Weinberg equilibrium,HWE)。采用Binary logstic回归通过校正性别、年龄、吸烟和饮酒四个影响因素计算比值比(Odds ratios,OR)和95%可信区间(Confidence Intervals,CI),对基因多态性和肝癌的患病风险进行关联分析。结果:1.CD44基因三个SNP基因型频率在肝癌组和对照组中的分布符合哈-温平衡,P值均大于0.05,说明选择的样本具有群体代表性。2.本研究发现rs8193位点共有CC、CT和TT三种基因型。以CC基因型为参考基因型,未发现CT和TT基因型与肝癌的患病风险有相关性(P值均大于0.05)。以C等位基因为参考基因,T基因型与肝癌的患病风险无相关性(P>0.05)。无论是在显性模型还是隐性模型分析时,均未发现有基因型与肝癌的患病风险有相关性(P值均大于0.05)。3.本研究发现rs10836347位点共有CC、CT两种基因型。以CC基因型为参考基因,未发现CT基因型与肝癌的患病风险有相关性(P=0.253)。以C等位基因为参考基因,T基因型与肝癌的患病风险无相关性(P=0.271)。4.本研究发现rs13347位点共有CC、CT和TT三种基因型。以CC基因型为参考基因,携带CT基因型的个体可以增加肝癌的患病风险至1.626倍(95%CI:1.057-2.500,P=0.027)。携带TT基因型的个体可以增加肝癌的患病风险至1.965倍(95%CI:1.043-3.702,P=0.037)。以C等位基因为参考基因,T基因型可以增加肝癌的患病风险至1.461倍(95%CI:1.091-1.956,P=0.011)。在显性模型分析中,CT+TT与CC基因型相比,可以增加肝癌的患病风险至1.697倍(95%CI:1.130-2.549,P=0.011)。在分析隐性模型时,未发现其与肝癌的患病风险有相关性(P=0.549)。5.对性别、年龄、吸烟和饮酒等危险因素进行分层分析时发现,女性人群中,rs13347位点的CT基因型可以增加肝癌的患病风险至2.675倍(95%CI:1.004-7.132,P=0.049),TT基因型可以增加肝癌的患病风险至5.922倍(95%CI:1.083-33.164,P=0.040);在年龄≥50岁组中,rs13347位点的CT基因型可以显著增加肝癌的患病风险至2.157倍(95%CI:1.113-4.181,P=0.023),TT基因型显著增加肝癌的患病风险至3.405倍(95%CI:1.263-9.178,P=0.015);在饮酒人群中,rs10836347位点的CT基因型显著增加肝癌的患病风险至4.552倍(95%CI:1.205-17.192,P=0.025),rs13347位点的CT基因型与肝癌的患病风险无相关性(P=0.179)。TT基因型显著增加肝癌的患病风险至4.549倍(95%CI:1.244-16.635,P=0.022)。6.在进行单倍型分析时发现,TTT单倍型显著增加了肝癌的患病风险(OR=207.16,P=0.014),表明TTT单倍型可能是肝癌的一个危险因素。结论:CD44基因rs8193、rs10836347位点的基因多态性与肝癌的患病风险无相关性。Rs13347位点的T等位基因的基因突变可增加肝癌的患病风险。第二部分肝癌血清糖蛋白聚糖谱 目的:糖基化修饰是蛋白质翻译后最常见的修饰之一。同一蛋白质由于糖链结构的差异可能会导致功能的差异。男性肝癌的发病率明显高于女性,而女性的预后生存率却明显高于男性。本部分研究通过凝集素芯片技术对男性和女性在肝癌发生过程中的血清糖蛋白谱进行检测,旨在研究其糖蛋白糖谱特征性变化,筛选出男女肝癌差异性的糖谱标志,为男女肝癌发病差异研究提供新思路及实验基础。方法:实验主要包含以下步骤:(1)血清低丰度蛋白的收集:等体积混合4组(男性对照组、男性肝癌组、女性对照组和女性肝癌组)患者血清,使用高丰度蛋白去除柱收集血清低丰度蛋白;(2)将收集的低丰度蛋白经除盐、超滤、测定浓度后处理为待标记缓冲液;(3)待测低丰度蛋白CY5标记;(4)凝集素芯片的点制及芯片的杂交;(5)芯片扫描、数据提取;(6)数据统计采用SPSS 13.0,符合正态分布且方差齐性的数据采用两独立样本的均数t检验,方差不齐者采用非参数秩和检验。(7)凝集素印迹。结果:在男性肝癌组和对照组中共筛选出12种差异的凝集素亲和信号,它们是AAL、Con A、DSL、ECL、LCA、MNA-G、MNA-M、PHAE、PSA、SNA,EBL、SNA-I、WFA,WFL。提示在男性肝癌的发生过程中血清糖蛋白聚糖谱中末端核心岩藻糖、双天线结构、α1,6连接的岩藻糖半乳糖胺、半乳糖、甘露糖残基、平分型Glc NAc等糖链结构增加,β-1,4半乳糖-N-乙酰葡糖胺和Gal NAcα/β-1,3/6Gal结构减少。在女性肝癌组和对照组中共筛选出13种差异的凝集素亲和信号,它们是AAL、CALSEPA、Con A、DSL、LCA、LTL、MNA-M、PHA-E、RCA I,RCA120、SNA,EBL、SNA-I、WFA,WFL、WGA,提示在女性肝癌的发生过程中血清糖蛋白聚糖谱中末端核心岩藻糖、双天线甘露糖结构、α1,6连接的岩藻糖半乳糖胺、平分型Glc NAc等糖链结构增加,高甘露糖、双天线结构和Gal NAcα/β-1,3/6Gal结构减少。在男性肝癌组和女性肝癌组中共筛选出7种差异的凝集素亲和信号,提示男性肝癌患者血清中含有较多的双天线、N-乙酰基-D-半乳糖胺、半乳糖、甘露糖残基、唾液酸等结构,而平分型结构和Gal NAcα/β-1,3/6Gal结构较女性肝癌患者减少。结论:不同性别肝癌患者血清蛋白糖谱存在差异,男性肝癌的高发病率及高病死率可能和糖链结构的改变有关。第三部分血清DKK1糖蛋白对肝癌诊断价值交META分析目的:系统评价血清DKK1对肝癌的诊断价值。方法:计算机检索外文数据库:Pub Med、EMBASE、Science Direct、Elsevier、Springer、EBSCO、Cochran e library。中文数据库:中国期刊网全文数据库(CNKI)、万方数据库(WF)、中国生物医学文献数据库(CMCC)和中文科技期刊全文数据库(VIP),检索时间截止至2016年1月。按照改来的文献进行严格的筛选,提取所需要的纳入文献的基本资料信息。使用Meta-Di Sc软件进行统计分析,根据异质性特点选择相应的效应模型进行计算合并的敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和诊断比值比(DOR),绘制汇总受试者工作曲线(SROC),并计算曲线下面积(AUC)。结果:共检索到452篇相关文献,最终纳入11篇文献,提供了13个DKK1诊断肝癌的研究结果。Meta分析数据显示DKK1诊断肝癌的合并敏感度为72%,合并特异度为88%,DOR为25.95,AUC为0.872。其中的6篇文献,提供8个DKK1联合AFP诊断肝癌的研究结果,汇总DKK1联合AFP诊断肝癌的合并敏感度为81%,合并特异度为85%,DKK1联合AFP检测的DOR为31.28,AUC为0.913。结论:血清DKK1在肝癌的诊断中具有较高的敏感度。采用DKK1联合AFP检测,可显著提高两者对肝癌的诊断效能。