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为了探索不同浓度抗冷冻蛋白Ⅲ对猪卵母细胞玻璃化冷冻的保护作用,寻找冷冻液中最合适的抗冷冻蛋白浓度,本研究以GV期、MⅡ期的猪卵母细胞为研究对象,分别在冷冻液中添加不同浓度(250 ng/m L、500ng/m L、750 ng/m L、1000 ng/m L、1200 ng/m L)AFPⅢ,分析冷冻前后卵母细胞的发育、ROS含量的变化以及卵母细胞DNA损伤的情况,以期为改善猪和其他低温敏感性物种的卵母细胞冷冻保存,进一步提高卵母细胞玻璃化冷冻保存效率提供理论依据。结果发现:1.冷冻液处理实验中,添加AFP III浓度为250 ng/m L、500 ng/m L、750 ng/m L时能够提高GV期卵母细胞分裂率、囊胚率,其中添加500 ng/m L组分裂率显著高于冷冻液处理组(P<0.05),而添加AFPⅢ浓度为1200ng/m L时分裂率、囊胚率均显著低于其他各组(P<0.05)。2.玻璃化冷冻-复苏实验中,冷冻液中添加250 ng/m L、500 ng/m L、750ng/m L AFPⅢ提高了冷冻-复苏后GV期卵母细胞的分裂率、囊胚率,添加AFP III浓度为500 ng/m L时,卵母细胞分裂率、囊胚率显著高于冷冻对照组(P<0.05)。综合1、2结果,添加500 ng/m L AFPⅢ对玻璃化冷冻GV期猪卵母细胞的保护效果最佳。3.冷冻液处理实验中,AFP III各浓度组均能够提高MII期卵母细胞囊胚率,其中添加AFPⅢ浓度为500 ng/m L、750 ng/m L、1000 ng/m L、1200ng/m L时,囊胚率显著高于冷冻液处理组(P<0.05),而750 ng/m L组囊胚率显著高于其他各浓度组(P<0.05)。4.玻璃化冷冻-复苏实验中,添加不同浓度AFP III,卵母细胞分裂率均高于冷冻对照组,其中添加AFP III浓度为750 ng/m L时,卵母细胞分裂率显著高于冷冻对照组及其他各AFP III浓度组(P<0.05);综合3、4结果,冷冻液中添加AFPⅢ浓度为750 ng/m L时对玻璃化冷冻MⅡ期猪卵母细胞的保护效果最佳。5.玻璃化冷冻会导致猪卵母细胞出现氧化应激反应,而在冷冻液中添加AFPⅢ的冷冻组ROS含量显著低于未添加AFP III的冷冻对照组(P<0.05),因此,AFPⅢ可以有效降低玻璃化冷冻猪卵母细胞的氧化应激水平,对玻璃化冷冻卵母细胞起到保护作用。6.玻璃化冷冻会使猪卵母细胞的DNA损伤较重,但添加AFP III的冷冻组尾部DNA(Tail DNA%)和OTM尾矩值(Olive Tail Moment)显著低于未添加AFP III的冷冻对照组(P<0.05),因此得知,AFPⅢ能够减轻玻璃化冷冻对卵母细胞造成的DNA损伤。综上所述,AFP III可以提高玻璃化冷冻后卵母细胞的体外发育能力,降低冷冻-复苏后卵母细胞ROS含量,减轻玻璃化冷冻引起的卵母细胞DNA损伤程度。