γ-TmT对食管鱗状细胞癌作用的体外细胞实验研究

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目的:(1)使用γ-TMT、木犀草素和亚硒酸钠单独或及联合对Eca-109细胞进行干预,探讨其对细胞生长和细胞凋亡的作用。(2)观察亚硒酸钠、硒和γ-TMT单独及联合干预对食管癌Eca-109细胞抗氧化酶活性的影响。(3)评价亚硒酸钠、γ-TMT和木犀草素对Eca-109细胞凋亡相关蛋白Bcl-2, Bax和caspase-3的影响。方法:(1)利用四甲基氮唑蓝(Methyl Thiazolyl Tetrazolium, MTT)法测定γ-TMT、亚硒酸钠和木犀草素干预对Eca109细胞增殖的影响;倒置显微镜观察不同剂量干预物对细胞形态学变化的影响;流式细胞术检测细胞凋亡情况。(2)使用试剂盒测定γ-TMT、木犀草素和亚硒酸钠干预Eca-109细胞后不同剂量组抗氧化酶活性的指标,包括谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)=谷胱甘肽还原酶(GR)、过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(SOD)以及总抗氧化能力(TAOC)和丙二醛(MDA)的测定。(3)用γ-TMT、木犀草素和亚硒酸钠处理Eca-109细胞,提取蛋白和RNA,通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定Bcl-2和Bax两个凋亡蛋白的表达,并通过酶联免疫吸附法测定caspase-3蛋白表达,分析其在Eca-109细胞凋亡中的作用。结果:(1)MTT分析结果表明,随着γ-TMT浓度增加,其对细胞增殖的抑制作用显著增加,具有剂量效应关系(p<0.05)。流式细胞术分析细胞凋亡实验结果表明γ-TMT可显著诱导细胞凋亡(p<0.05)。γ-TMT与木犀草素联合干预可抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,与γ-TMT单独干预具有显著差异。亚硒酸钠干预食管上皮细胞可显著抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡。亚硒酸钠与γ-TMT联合干预结果表明,与单独干预结果比较,细胞增殖的抑制率及诱导细胞凋亡的凋亡率显著增加(p<0.05)。(2)亚硒酸钠、γ-TMT和木犀草素对抗氧化酶活性的影响具有显著差异,木犀草素对MDA活性没有影响,γ-TMT对CAT活性没有影响。(3) γ-TMT、木犀草素和亚硒酸钠单独及联合于预可抑制Bcl-2蛋白表达并增加Bax蛋白mRNA水平,升高caspase-3蛋白浓度。结论:γTMT,木犀草素和亚硒酸钠是强效的抗氧化剂和抗肿瘤剂。它们的组合使用给食管癌及其他癌症的预防和治疗提供了理论基础和应用参考。同时,这些癌症治疗药物为药物协同机制的研究提供了有用的理论基础,并有望将其作为化疗增敏剂在癌症的治疗中进行应用。
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