论文部分内容阅读
目的研究辛伐他汀(simvastatin, Sim)单独或联合柔红霉素(daunorubicin, DNR)对SHI-1细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法(1)体外培养人急性单核细胞白血病细胞株SHI-1。(2)四甲基偶氮核(MTT)法检测不同浓度辛伐他汀作用不同时间后,对SHI-1细胞的生长抑制情况。(3)实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、20umol/L),处理48h后,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布情况;半定量RT-PCR法检测Caspase-3、Bcl-2 mRNA的表达情况;Western blot法检测Caspase-3、Bcl-2蛋白表达情况。(4)实验分为单纯DNR组、Sim+DNR两组,台盼蓝拒染法检测两组细胞增殖抑制情况,用联合系数判断两药合用效果,倒置显微镜下观察两组细胞生长状况,流式细胞仪检测两组细胞凋亡情况。结果(1)MTT检测发现辛伐他汀作用SHI-1细胞后,其生长抑制作用明显,呈时间与剂量依赖性。(2)流式细胞仪分析结果表明,与对照组相比,不同浓度辛伐他汀处理SHI-1细胞48h后,G0/G1期细胞百分比明显增多,5umol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞后能明显阻滞细胞周期进程并诱导细胞凋亡;(3)RT-PCR检测发现细胞中Bcl-2 mRNA随辛伐他汀浓度增加表达下降,Caspase-3 mRNA随辛伐他汀浓度增加表达增加(P<0.05);Western blot法示SHI-1细胞中Bcl-2蛋白随辛伐他汀浓度升高而降低,Caspase-3蛋白随辛伐他汀浓度升高而增加(P<0.05)。(4)DNR可抑制SHI-1细胞生长,呈时间和剂量依赖性(P<0.05),12、36h的半数抑制浓度分别为1.27、0.27μmol/L,5umol/L辛伐他汀联合0.1umol/L DNR对SHI-1细胞的生长抑制具有协同作用(CI<1,P<0.05),倒置显微镜下可见两药联合处理后细胞稀疏,亚二倍峰面积、早期凋亡率较单纯DNR组高(P<0.05)。结论辛伐他汀对SHI-1细胞具有明显生长抑制作用,呈时间与剂量依赖性;辛伐他汀能诱导SHI-1细胞发生凋亡,并将细胞周期阻滞于G0/G1期;辛伐他汀对SHI-1细胞增殖抑制与诱导凋亡作用可能与下调bcl-2和上调caspase-3表达有关;辛伐他汀联合DNR后对细胞生长抑制和周期阻滞具有协同作用。