【摘 要】
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利用转基因植物作为生物反应器规模化生产高附加值的重组蛋白质,如细胞素、激素、单克隆抗体、营养蛋白、酶、疫苗、各种生长因子及其它一些药物,己成为当今转基因植物的研究热
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利用转基因植物作为生物反应器规模化生产高附加值的重组蛋白质,如细胞素、激素、单克隆抗体、营养蛋白、酶、疫苗、各种生长因子及其它一些药物,己成为当今转基因植物的研究热点之一。人乳铁蛋白(human lactoferrin,hLF)是人体非特异性免疫系统的重要成员之一,具有多种生物学功能。本文选择马铃薯作为表达外源蛋白hLF的生物反应器,利用高水平块茎专一性表达的class-Ⅰ patatin基因的启动子与hLF基因cDNA融合,通过农杆菌介导的方法将其导入马铃薯中,并通过PCR、RT-PCR、ELISA及Western blot等分子检测,证实获得hLF转基因马铃薯并检测了hLF蛋白的表达。主要研究结果如下:
(1)利用农杆菌介导法,将外源基因hLF和class-Ⅰ patatin基因的块茎专一性启动子整合到马铃薯基因组中,通过诱导愈伤组织,获得再生植株,成功建立马铃薯转基因体系。
(2)利用PCR的方法对马铃薯总DNA快速检测,证实获得转基因马铃薯植株。
(3)由于外源基因插入的位点不一样,导致转录水平也不一样,用RT-PCR的方法检测出各转基因马铃薯植株的人乳铁蛋白基因在转录水平存在差异。
(4)通过ELISA方法对马铃薯表达人乳铁蛋白进行定量的检测,得出转基因马铃薯植株最高表达hLF蛋白的量为53.28 ng/mg可溶性蛋白,同时还发现转基因马铃薯植株间表达量也不一样,分别在19.36-53.28 ng/mg之间。
(5) 再进一步用Western blot方法对马铃薯表达人乳铁蛋白进行定性检测,得出重组hLF蛋白和天然hLF蛋白具有相同的免疫结合活性。
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