MicroRNA-92a在急性呼吸窘迫综合征中的作用和机制研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vincent_iong
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目的:探讨miR-92a在急性呼吸窘迫综合征中的作用及相关分子机制,明确miR-92a在急性呼吸窘迫综合征细胞模型中的功能。方法:使用LPS(10ug/ml)刺激人肺微血管内皮细胞建立ARDS体外模型,分别设立了对照组及LPS刺激3小时、6小时、12小时、24小时、48小时组,使用qRT-PCR检测miR-92a的表达,确定LPS作用的最佳时间。使用miR-92a inhibitor抑制miR-92a的表达,同时设立对照组、模型组及阴性对照组。检测细胞的通透性变化、细胞迁移能力、体外小管形成能力,ELISA检测细胞上清液IL-10、IL-6、TNF-α的表达,western blot及qRT-PCR检测细胞间连接蛋白VE-cadherin及ITGA5的表达情况,并使用荧光素酶报告实验验证miR-92a的靶基因ITGA5。最后检测PI3K/Akt信号通路相关分子表达的变化情况。结果:与正常对照组相比,经LPS处理后24小时HPMEC细胞miR-92a表达升高最明显。当使用miR-92a inhibitor抑制miR-92a的表达后,HPMEC单层细胞渗透性减弱,细胞迁移能力及体外小管形成能力增强,细胞间连接蛋白VE-cadherin表达增加,炎症反应减弱。同时miR-92a与ITGA5在转录水平及蛋白水平均存在负向调控关系,荧光素酶报告实验证实IGTA5是miR-92a的靶基因。此外,western blot显示抑制miR-92a后,p-Akt表达升高。结论:在LPS诱导的HPMEC细胞损伤中,miR-92a表达升高,且miR-92a可能靶向ITGA5通过PI3K/Akt信号通路参与LPS诱导的HPMEC的内皮屏障损伤及炎症反应等,抑制miR-92a可以改善LPS对HPMEC的损伤作用。表明miR-92a具有作为ALI/ARDS预后指标和未来治疗的靶标的潜力。
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