【摘 要】
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外源性hTGFβ1在体外培养成人退变椎间盘细胞中表达的研究目的：构建人转化生长因子?1（hTGF-?1）基因真核表达质粒并转染体外培养的成人退变椎间盘细胞，测定hTGF-?1基因的表达产物，
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外源性hTGFβ1在体外培养成人退变椎间盘细胞中表达的研究目的：构建人转化生长因子?1（hTGF-?1）基因真核表达质粒并转染体外培养的成人退变椎间盘细胞，测定hTGF-?1基因的表达产物，为椎间盘退变基因治疗的临床应用提供实验基础。方法：1.含hTGF-?1cDNA的PUC19-hTGF-?1质粒于大肠杆菌JM109中扩增；提取及纯化PUC19-hTGF-?1质粒；限制性酶切PUC19-hTGF-?1及真核表达质粒PCI，用连接酶连接 hTGF-?1至真核表达质粒PCI内。克隆出真核表达载体PCI-hTGF-?1。2.培养成人退变椎间盘细胞；3.应用本实验室构建的PCI-hTGF-?1真核载体对原代退变椎间盘细胞进行转染，并设定对照组；5.用免疫组织化学方法对转染细胞进行表达产物测定；6.用VIDAS数据分析系统对实验数据进行定量分析。结果：1.凝胶电泳及碱基序列测定提取纯化的PCI-hTGF-?1含有大小正确的 hTGF-?1 cDNA碱基片段，其序列为编码目的基因的正确序列。2. 原代纤维环细胞转染中真核表达载体PCI-hTGF-?1阳性细胞产物的光密度值为PCI组的3.49-3.56倍，为未转染组的3.43-3.55倍；3.原代髓核细胞转染中真核表达载体PCI-hTGF-?1阳性细胞产物的光密度值为PCI组的3.46-3.69倍，为未转染组的3.33-3.63倍。结论：1.成功地构建了hTGF-?1基因的真核表达质粒PCI-hTGF-?1；2. 本实验室构建的真核表达载体PCI-hTGF-?1可以成功转染体外培养的成人退变椎间盘细胞并可获得hTGF-?1基因产物的高表达。
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