表没食子儿茶素没食子酸酯通过抑制HDAC2改善心肌细胞肥大的机制

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目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)通过抑制组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)改善苯肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导的小鼠心肌细胞肥大的作用,为临床防治肥厚性心肌病提供新的思路。方法:一、选取1-3天龄新生昆明小鼠为研究对象,酶消化法分离获得新生小鼠心肌细胞,按照随机数字表法随机分为正常组、PE组、溶媒组(dimethylsulfoxide,DMSO),收集各组心肌细胞进行以下检测:(1)分别采用CCK-8法检测小鼠心肌细胞活性、免疫细胞化学染色法鉴定纯度以及检测心肌细胞表面积;(2)Western blot检验方式检测小鼠心肌细胞的心肌肥大标记物心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、β-心肌肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)的表达水平;(3)BCA蛋白定量法检测小鼠心肌细胞蛋白含量。二、将小鼠心肌细胞随机分为正常组,PE组,溶媒组,PE+EGCG组,收集各组小鼠心肌细胞进行以下检测:(1)实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及western blot检测方式检测锌指转录因子(GATA binding protein 4,GATA4)mRNA及蛋白表达量;(2)Western blot检验方式检测小鼠心肌细胞的心肌肥大标记物ANP和β-MHC;(3)Western blot检验方式检测HDAC2蛋白的表达量,比色法检测HDAC2的活性;(4)免疫荧光化学染色法检测心肌细胞表面积。结果:(1)原代心肌细胞已经培养成功,且纯度超过90%以上。CCK-8法检测心肌细胞存活率结果进行比较,PE浓度小于100μmol/L干预心肌细胞存活率较对照组无显著变化(P>0.05)。(2)免疫荧光结果显示,PE组心肌细胞的表面积明显高于正常组(P<0.01)。与正常组比较,PE组中HDAC2蛋白表达量及活性较正常组升高(均P<0.01);并且GATA4 mRNA和蛋白水平以及心肌肥大标记物ANP、β-MHC蛋白表达水平均明显上调(均P<0.01)。(3)免疫荧光化学染色法显示,与PE组及溶媒组比较,PE+EGCG组中心肌细胞表面积减少(P<0.01)。(4)Western blot检测显示,与PE组及溶媒组比较,PE+EGCG组中HDAC2蛋白表达量及活性明显降低(均P<0.01)。(5)Western blot检测显示,与PE组及溶媒组比较,PE+EGCG组中GATA4蛋白以及mRNA表达量均明显降低(均P<0.01);心肌肥大标记物ANP、β-MHC蛋白表达量下调(均P<0.01)。结论:(1)EGCG能够改善苯肾上腺素诱导的小鼠心肌细胞肥大。(2)EGCG可能是通过下调HDAC2的表达改善苯肾上腺素诱导的小鼠心肌细胞肥大。
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