ZE515对CP5型金黄色葡萄球菌灭活菌苗的免疫佐剂作用研究

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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起奶牛乳房炎的常见病原菌。由于该菌容易产生耐药性,传统的抗生素治疗不能有效控制该疾病。因此,采用疫苗预防金黄色葡萄球菌引起奶牛乳房炎越来越受到人们的关注。佐剂是疫苗的重要组成成分,可以增强疫苗诱导的特异性免疫反应以及改变免疫反应的类型。本文首先对从浙江省主要奶牛养殖区分离到的金黄色葡萄球菌分离株进行了荚膜多糖血清型分析,然后在已经证明一种含人参皂甙的植物油佐剂ZE515对猪口蹄疫疫苗有佐剂作用的基础上,研究ZE515对金黄色葡萄球菌疫苗的佐剂作用,为进一步研究控制奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌疫苗提供试验基础。  对从浙江省主要奶牛养殖区分离到的108株金黄色葡萄球菌分离株进行荚膜多糖血清型分型,发现荚膜多糖5型(CP5)的金葡菌占46.3%,荚膜多糖8型(CP8)的金葡菌占32.4%,其它血清型为21.3%。以从杭州市郊菜奶牛场临床型奶牛乳房炎病例分离到的CP5型金黄色葡萄球菌HZ016为抗原,ZE515为佐剂制备成油乳剂疫苗,并以氢氧化铝铝胶佐剂疫苗为对照。将疫苗二次皮下注射免疫小鼠后检测血清抗体及其亚类、细胞因子(IL-5和IFN-γ),脾淋巴细胞增殖指数(SI)。结果显示,ZE515对S.aureus疫苗的佐剂作用显著强于常规铝胶佐剂,能显著增强小鼠抗体及其亚类的免疫应答(P<0.05),提高淋巴细胞增殖指数(P<0.05),提升血清IL-5和IFN-γ表达水平(P<0.05)。上述结果表明ZE515不仅提高了小鼠的体液免疫应答水平,同时还提高了细胞免疫应答水平。  在小鼠的攻毒试验中,我们首先确定了从杭州市郊某奶牛场临床型奶牛乳房炎病例分离到的CP5型金黄色葡萄球菌HZ016针对小鼠的半数致死量,为5×107 CFU。二次免疫后三周以半数致死量对小鼠进行攻毒试验,并以氢氧化铝铝胶佐剂疫苗为对照。结果显示,含ZE515的疫苗对S.aureus攻毒的保护率为75%,而含铝胶佐剂的疫苗保护率只有50%。该结果表明ZE515相对于氢氧化铝铝胶佐剂的疫苗具有更好的攻毒保护作用。  综上所述,浙江地省主要奶牛养殖区奶牛乳房感染的金黄色葡萄球菌荚膜多糖以CP5型为主。以灭活的CP5型金黄色葡萄球菌为抗原,以ZE515为佐剂制备成油乳剂疫苗,具有流动性好、稳定性高的优点。小鼠免疫试验表明ZE515对CP5型S.aureus疫苗免疫具有增强效果,能显著提高小鼠的体液免疫和细胞免疫水平,并能提高免疫小鼠对金黄色葡萄球菌感染,是一种较为理想的佐剂。本研究结果可为进一步研究金黄色葡萄球菌奶牛乳房炎提供参考。
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