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目的:
了解中国Leber遗传性视神经病(Lebers Hereditary Optic Neuropathy,LHON)患者少见线粒体DNA(Mitoehondrial DNA,mt-DNA)原发性突变位点特点。
研究对象与方法:
1.研究对象:2009年12月到2010年8月期间临床诊断LHON患者的外周血,提取总DNA,进行mt-DNA片段11321～11790、3207～3729及14201～14539扩增、测序,对G11778A、G3460A和T14484C突变位点进行筛查,对于以上3个突变位点均为阴性的患者进行mt-DNA片段3962～4356和11320～11789扩增、测序。
2.选取25例视力正常且无母系家族史的健康者为健康对照组,进行mt-DNA片段11321～11790、3207～3729及14201～14539扩增、测序,对G11778A、G3460A和T14484C突变位点进行筛查,对于以上3个突变位点均为阴性的患者进行mt-DNA片段3962～4356和11320～11789扩增、测序。
3.采用NCBI(美国国立生物技术信息中心)的BLAST(局部相似性基本查询工具)服务,与剑桥标准序列进行比对,分析LHON患者是否携带C4171A或G11696A突变位点,以及mt-DNA突变特点。
结果:
(1)3个常见原发性突变位点均为阴性患者37例,男性25例,女性12例,年龄7～45岁,平均发病年龄26岁,有母系家族史者10例。其中1例患者携带T4216C突变,未发现C4171A及G11696A突变位点。
(2)分析37例3个常见原发性突变位点阴性的患者mtDNA中C4171A及G11696A的所在片段,发现除上述已提及的突变位点外,还发现既往文献中未报道过的A4181G突变,导致氨基酸编码的改变。
(3)3个常见原发性突变位点阳性组患者31例,男性23例,女性8例,年龄7～63岁,平均发病年龄25岁。其中1例患者携带有T4216C突变,同时伴G11778A突变。
(4)健康对照组25例,均无母系家族史,男14例,女11例,年龄10～33岁,平均年龄24.3岁。发现C4071T突变1例,未发现G11696A、C4171A突变位点。
结论:
1.C4171A及G11696A未能在本组患者中被证实为是国内L,HON患者线粒体DNA少见原发突变位点,其在LHON患者外显中的作用尚需深入研究。
2.在本组研究中发现A4181G突变导致保守氨基酸序列改变,可能是新发现的少见原发性突变位点,尚需进一步研究证实。
3.本组研究尚可进一步证实T4216C为LHON相关的线粒体DNA继发性突变位点。