无抗性标记自主发光鲍曼不动杆菌的构建及怡莱霉素E的药效学研究

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鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)属于革兰氏阴性菌,是引起医院感染的重要病原菌。近年来耐药Ab出现的比率不断上升,公众对此产生关注。本研究首次将Tn7转座子与dif序列结合,一步法成功构建出一种无抗性标记的自主发光鲍曼不动杆菌(unmarked autoluminescent Ab,UAlAb),其基因组中含有能表达自主发光蛋白的基因luxCDABE,不需添加任何外源底物就可以自主发光,在黑暗条件下通过肉眼就能观察到发光。传统切除抗性标记的位点特异性重组方法都需要人工额外表达外源解离酶或者转座酶,Ab本身在增殖过程中会产生Xer解离酶,该酶可以识别dif序列从而切除序列之间的抗性基因,无需额外表达外源蛋白,操作简单方便,省去了中间很多不必要的麻烦。Xer重组系统用于切除抗性基因近几年才被报道,且大多用于分枝杆菌属的遗传操作,尚未见任何报道将其应用于Ab。本研究结果表明,构建的UAlAb其生理状态与亲本Ab(parent Ab,pt-Ab)相近,插入的基因对其生长不产生显著影响,可以通过检测相对发光单位(relative light units,RLUs)判断其生长状况。此外,利用UAlAb代替pt-Ab进行化合物的体外筛选和评价,通过RLUs判断其在体外对Ab的作用效果,可以大大减少时间、节约材料和节省精力,快速找出对Ab有效的潜在候选药物。结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的慢性传染疾病,由于耐药TB的出现,迫切需要具有新作用机理的抗耐药TB药物。怡莱霉素E(ilamycinE,IL-E)是来源于海洋链霉菌属的一种环状七肽化合物,有文献报道过IL-E具有显著的抗结核活性,其最小抑菌浓度优于一线抗结核药物利福平。本研究结果表明IL-E对Mtb具有良好的体外活性,且在较低浓度时对不同耐药类型的临床耐药菌株也有明显的效果,可能具有新的作用机制,具有重要的临床意义和进一步研究价值。
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