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[目的】建立并优化HIV-1env/HIV-1Aenv假病毒筛选抗HIV-1药物体系,对初筛活性好的化合物进行体外抗HIV-1活性研究。[方法]采用HIV-1包膜质粒pCNE49与HIV-1骨架质粒pNL4-3Luc R-E-共同转染293T细胞来获得HIV-1Luc假病毒,并采用Promega公司的荧光素酶活性分析系统,评价在不同浓度的DEAE-葡聚糖溶液的存在下,HIV-1Luc对TZM-bl细胞的感染力。对不同类型HIV-1上市药物进行抗假病毒活性评价,并与HIV-1mB病毒筛选体系所得结果进行比较,以验证该模型的可行性与有效性。进而将假病毒应用于化合物的抗HIV-1活性筛选。对活性较好的化合物进行进一步的体外抗HIV-1活性评价,包括采用MTT法检测化合物对不同细胞株的毒性作用,ELISA检测p24法、MTT法和荧光素酶分析方法在不同细胞中评价化合物对不同病毒株以及假病毒的抑制活性。[结果]HlV-1Luc对TZM-bl细胞的感染力随着DEAE-葡聚糖溶液浓度的升高显著增加,且荧光素酶报告基因的表达水平与加入的病毒量呈剂量依赖关系。不同阳性药物抑制HIV-1Luc的EC50与HIV-1IIIB病毒筛选体系所得EC50基本一致,该假病毒可用于抗HIV-1药物筛选。2-硫甲基吡唑-6-环已基嘧啶酮类化合物作为非核苷类逆转录酶抑制剂对HIV-1Luc均显示出了不同程度的抑制活性,其中WYM-17和WYM-25抑制活性显著。对化合物WYM-17和WYM-25进一步的体外抗HIV-1活性研究发现:WYM-25对C8166、MT-4、TZM-b1及PBMC细胞无明显细胞毒性,CC50均>20OμM;WYM-17和WYM-25具有广谱的抗 HIV-1 活性,对实验株(HIVIIIIB、HIV-1Ba-L)、临床株(HIV-1Tc、HIV-1wan)和耐药株(NRTI耐药株HIV-174v、PI耐药株HIV-12802)的复制均具有很强的抑制作用,EC50均在纳摩尔水平,而NNRTI耐药株HIV-1A17对这些化合物表现出不同程度的耐药;WYM-17和WYM-25对HIV-1重组逆转录酶有一定的抑制作用;分子对接实验则表明化合物与逆转录酶间具有较强的相互作用。[结论]本研究成功建立了基于HIV-1env/HIV-1Aenv假病毒的抗HIV-1药物筛选体系,该体系可用于NNRTIs、NRTIs、INIs和FIs的筛选,不适用于PI和CRIs的筛选。对化合物的抗HIV-1活性研究表明,WYM-17和WYM-25对不同病毒株有较强的体外抗HIV-1活性,分子模拟研究表明对该化合物还有进一步优化的空间,该化合物可以作为先导化合物,进一步发展新型高效抗耐药性的HIV-1抑制剂。