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目的:探讨贵州省宽叶缬草在分子水平上的遗传关系;并对宽叶缬草挥发油进行质量评价研究。方法:(1)通过优化PCR扩增体系中Mix、DNA模版、引物的浓度,建立宽叶缬草RAPD及ISSR扩增反应体系。(2)利用最佳反应体系,筛选RAPD、ISSR随机引物以及ISSR有效引物的最佳退火温度。(3)运用RAPD、ISSR两种方法分别对贵州省20个居群的宽叶缬草进行遗传多样性分析,并利用NTSYS 2.1e软件进行UPGMA聚类分析。(4)运用SPSS 17.0软件对RAPD与ISSR的遗传相似性系数进行相关性分析。(5)基于叶绿体DNA片段,利用trn L-F、mat K序列对宽叶缬草进行序列分析,运用Bioedit、MEGA 5.0软件计算贵州省宽叶缬草居群遗传距离,并进行聚类分析建立系统发育树。(6)采用2010年版《中国药典》中收藏的方法对宽叶缬草挥发油进行理化性质的测定。(7)采用薄层色谱鉴别法对宽叶缬草挥发油中化学成分进行定性鉴别。(8)采用气相色谱法对宽叶缬草挥发油中乙酸龙脑酯的含量进行测定。(9)采用SPSS17.0软件分析宽叶缬草挥发油中乙酸龙脑酯的含量与海拔高度之间的相关性。结果:(1)建立了适合宽叶缬草RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,包含2×Taq PCR Master Mix 16μL,DNA模板100 ng,引物0.60μmol/L,dd H2O补齐。(2)建立了适合宽叶缬草ISSR扩增的反应体系:总体积25μL,包含2×Taq PCR Master Mix 14μL,DNA模板60 ng,引物0.70μmol/L,dd H2O补齐。(3)从59条RAPD随机引物中筛选出了17条有效RAPD引物,17条引物20份不同居群宽叶缬草共扩增出197条条带,其中多态性条带158条,多态性比率80.20%,遗传相似性系数0.4010~0.9391。(4)从50条ISSR引物中筛选出了17条有效ISSR引物,并确定了各引物的最佳退火温度,17条引物20份不同居群宽叶缬草共扩增出224条条带,其中多态性条带194条,多态性比率86.61%,遗传相似性系数0.4732~0.8929。(5)通过UPGMA聚类分析,RAPD、ISSR两种方法共同体现出4号居群样品(剑河县敏洞上坝;2014)单独聚为一组,其余19份居群样品聚为一组;不同宽叶缬草居群总体呈现剑河地区的聚为一组,江口地区的聚为另一组;2013年份的聚为一组,2015年份的聚为另一组。(6)RAPD与ISSR的相关性分析系数为0.875,在0.01水平呈显著正相关。(7)23份不同居群宽叶缬草trn L-F序列测序显示,trn L-F序列长度947~985 bp,GC%含量为35.92~36.55%,排位后的长度为930 bp,其中差异位点8个,变异位点5个,居群间的遗传距离为0.0000~0.0054,居群总体遗传距离为0.0005,ML、NJ、ME、UPGMA四种聚类构树结果显示15(江口县官和乡泗渡村寨上组)、18(江口县凯德镇育苗基地)号样品明显地与大部分的宽叶缬草样品区分出来。(8)23份不同居群宽叶缬草mat K序列测序显示,mat K序列长度1080~1088 bp,GC%含量为35.19~36.64%,排位后长度为1055 bp,差异位点2个,变异位点1个,简约信息位点1个,居群间的遗传距离为0.0000~0.0009,居群总体遗传距离为0.0003,ML、NJ、ME、UPGMA四种聚类构树结果显示2(剑河县太拥乡太平村)、5(剑河县岑松镇稿旁村)、6(剑河县关么乡苗岭村)、20(江口县闵孝镇渔凉溪村)号样品聚为一类,其余19份聚为一类。(9)宽叶缬草挥发油为外观显淡黄色的澄清液体,具有缬草挥发油固有的臭气,味微苦,其酸值为2.89~4.11 mg/g、皂化值为171.08~183.00 mg/g、折光率为1.4728~1.4796、比旋度为39.21~58.66°。(10)建立了宽叶缬草挥发油薄层鉴别条件:环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(6:0.2:0.03)作为展开剂,硅胶G板饱和15 min,5%香草醛硫酸溶液显色,得到8~13个丰富、可辨斑点。(11)经气相色谱法考察,宽叶缬草挥发油中乙酸龙脑酯在1.0025~8.0200 mg/m L内线性关系良好,r2=0.9991,平均回收率98.45%,宽叶缬草挥发油中乙酸龙脑酯的含量为29.64~59.65%。(12)生长于不同海拔高度的宽叶缬草挥发油中乙酸龙脑酯的含量随海拔的增高而呈现增高趋势,到一定海拔高度,呈下降趋势,相关性分析表明宽叶缬草挥发油中乙酸龙脑酯的含量与海拔高度相关性不显著。结论:(1)贵州省不同居群宽叶缬草具有较高的遗传多样性,所得RAPD、ISSR分子标记可用于宽叶缬草的遗传多样性研究,为今后开发宽叶缬草的选种与育种奠定了基础。(2)贵州省宽叶缬草居群内trn L-F、mat K序列具有高度保守性。(3)宽叶缬草挥发油质量控制的评价研究,为今后合理开发宽叶缬草挥发油提供了一定的理论依据。