绵羊痘病毒（Sheeppox virus,SPPV）引起的绵羊痘发病症状和人类的天花很像,又称“羊天花”。目前SPPV的致病机制和机体的免疫机制研究都不清楚。痘病毒的病毒生物学特征及致病机制都主要参考模式病毒痘苗病毒（Vaccinia virus,VACV）。双链RNA蛋白激酶（doublestranded RNA-dependent protein kinase,PKR）是宿主抗病毒通路的关键分子之一,而大量研究表明,痘苗病毒编码的E3L蛋白可通过直接或间接与PKR相互作用并抑制PKR磷酸化。SPPV基因组中存在一个与VACV E3L基因序列高度相似的同源基因,但是关于SPPV K3L基因的研究较少,其具体的功能也尚不清楚。因此,本论文初步研究了SPPV E3L蛋白与宿主PKR的相互作用。首先我们建立分析检测SPPV的基因组的荧光定量的方法,结果表明,该方法具有特异性强、灵敏度高(检测下限为10¹ copies/μL)、重复性好（组内组间重复性试验的变异系数均小于3%）的特点,可以用于临床样品的检测。然后我们对实验室分离保存的SPPV进行病毒滴度进行了测定,并绘制本研究所使用SPPV一步生长曲线,结果显示,在接种0¹2h病毒拷贝数几乎没变化,在12⁷2h病毒呈对数扩增,84h后进入平台期。通过Western-blot方法检测不同时间点SPPV感染Hela细胞后细胞内PKR及其下游分子的活化水平,结果表明:SPPV感染引起的PKR及其下游分子的活化存在时间依赖性。然后通过免疫共沉淀和细胞中瞬时表达E3L蛋白来研究E3L与PKR的互作关系;为了验证SPPV-E3L蛋白对PKR-eIF2α磷酸化的影响以及关键功能位点的确定,本研究构建了SPPV-E3L、SPPV-mE3L（基于SPPV-E3L在135、168和174位点的定点突变）、VACV-E3L和ORFV-E3L的真核表达载体并在Hela细胞中进行瞬时表达。本研究表明SPPV-E3L蛋白不能抑制Hela细胞中的PKR的磷酸化,135、168和174位3个关键位点的突变可能影响了这一功能。在Hela细胞中瞬时表达VACV-E3L蛋白能提高SPPV的增殖水平。免疫沉淀试验确定4种蛋白都能与PKR有物理相互作用;VACV-E3L、ORFV-E3L和SPPV-mE3L蛋白能够抑制Hela细胞内PKR的磷酸化,而SPPV-E3L蛋白不能抑制PKR磷酸化。瞬时表达VACV-E3L蛋白能够影响SPPV的复制。最后,本论文还利用Crispr/Cas9技术建立PKR基因敲除的Hela细胞系,并获得了PKR基因敲除的Hela细胞株,经测序证实PKR基因翻译提前终止,PKR无功能活性。本研究为进一步深入研究SPPV E3L的生物学功能以及PKR的抗病毒的机制奠定了基础。