【摘 要】
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目的:成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)是具有促进成骨和刺激造血等多方面作用的14肽.目前对于其生物活性的研究仅限于人工合成的成骨生长肽.该实验旨在利用基因工
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目的:成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)是具有促进成骨和刺激造血等多方面作用的14肽.目前对于其生物活性的研究仅限于人工合成的成骨生长肽.该实验旨在利用基因工程的方法构建高水平表达成骨生长肽的基因工程菌,以研究重组成骨生长肽(rOGP)的促成骨活性.方法:一、将原核翻译增强子序列插入到质粒pRIT-2T启动子的下游,再与成骨生长肽融合蛋白基因重组.热诱导表达融合蛋白,经亲和层析、Factor Xa酶切、凝胶过滤层析得到纯化的成骨生长肽.二、检验动物模型骨折后不同时期血清Ca、P、AKP(碱性磷酸酶)水平;作骨折断端病理切片,以观察重组成骨生长肽对骨折愈合的影响.结果:一、成功构建了可高水平表达成骨生长肽基因的重组质粒,成骨生长肽融合蛋白的表达量超过了大肠杆菌蛋白总量的50﹪.二、重组成骨生长肽具有降低血清Ca,升高血清P、AKP及加速骨折愈合的作用,且其促成骨效果明显优于目前临床常用的促成骨生物制剂骨宁注射液.结论:一、插入了原核翻译增强子的pRIT-2T质粒可作为高效表达融合蛋白的通用质粒载体.二、以重组的方式产生的成骨生长肽促进骨折愈合,并且效果优于sOGP<,10~14>与骨宁注射液.三、可在此研究基础上,进一步优化实验步骤、降低成本,以利于大规模生产,应用于临床.
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