论文部分内容阅读
吗啡是一种阿片类受体激动剂,在临床实践过程中常用于急慢性疼痛的治疗,特别是对神经病理性疼痛和癌痛的治疗。然而,患者长期反复使用吗啡将会产生对吗啡镇痛作用的耐受和依赖,其具体表现为镇痛作用下降、作用持续时间缩短、疼痛过敏及停药后疼痛加剧等,需要增加吗啡剂量才能达到耐受前的镇痛效果。由于吗啡存在上述弊端,使其临床应用受到了一定的限制。近些年来,学者们对吗啡耐受的机制从细胞和分子水平进行了大量研究,为临床上更加有效应用吗啡治疗疼痛提供了重要理论依据。然而,到目前为止吗啡的镇痛和耐受机制尚不完全清楚。有研究发现中枢神经系统的P2X4受体和小胶质细胞在神经病理性疼痛中充当重要作用,p38MAPK信号通道也参与其作用过程,肿瘤坏死因子和白介素1β等细胞因子以及神经递质脑源性神经生长因子对神经病理性疼痛和吗啡耐受的形成也有一定的作用。而且,最近有文献报道,吗啡能够通过P2X4受体途径对小胶质细胞的迁徙产生影响。由于神经病理性疼痛和吗啡耐受在发生和发展上有许多共同机制,因此本研究推断P2X4R/p38MAPK可能也参与吗啡耐受的形成,并发挥重要作用。为论证上述假说,本实验拟进行一下两方面的研究：(1)吗啡耐受对脊髓和背根神经节P2X4受体表达和小胶质细胞激活的影响；(2)探讨嘌呤受体拮抗剂TNP-ATP(P1-4受体拮抗剂)和PPADS(P1,2,3,5,7受体拮抗剂)对吗啡耐受的作用及其作用机制。本研究有助于进一步揭示吗啡耐受机制,特别是P2X4受体在吗啡耐受机制中的作用,并为研制开发新型的镇痛药提供理论依据。目的观察慢性吗啡耐受对大鼠痛阈的影响方法12只成年雄性SD大鼠,质量250-300g,鞘内置管成功后,随机分为2组(n=6),NS组：大鼠经鞘内置管并注入生理盐水；MOR组：大鼠并经鞘内置管注入吗啡10μg,每天两次。鞘内置管3d后,开始鞘内输注生理盐水或吗啡,鞘内注射5d后建立大鼠慢性吗啡耐受模型。结果与NS组比较,MOR组鞘内注射吗啡后大鼠第1天痛敏阈值明显上升,而第3,5,7天痛敏阈值逐渐下降,并在鞘内注射吗啡第7日降至最低点。结论连续7天鞘内注射吗啡能够导致大鼠发生慢性吗啡耐受。目的1.观察慢性吗啡耐受对大鼠脊髓背角小胶质细胞激活的影响2.观察慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角和背根神经节P2X4R表达的影响。方法36只成年雄性SD大鼠,质量250-300g,鞘内置管成功后,随机分为2组(n=18),NS组：大鼠经鞘内置管并注入生理盐水；MOR组：大鼠并经鞘内置管注入吗啡10μg,每天两次。鞘内置管3d后,开始鞘内输注生理盐水或吗啡,鞘内注射5d后建立大鼠吗啡耐受模型,鞘内注射吗啡1、3、7d后取脊髓腰膨大部和背根神经节,免疫组化测定检测P2X4R、OX-42的表达。结果免疫组化结果显示吗啡耐受大鼠脊髓小胶质细胞呈激活状态,P2X4R主要在小胶质细胞上表达,与盐水组相比较,吗啡组大鼠脊髓背角P2X4R阳性细胞数明显增多,而背根神经节P2X4R阳性细胞数变化不明显。结论吗啡耐受大鼠脊髓的P2X4R表达明显增加,提示脊髓小胶质细胞P2X4R可能参与吗啡耐受的发生。目的1.观察鞘内注射嘌呤受体拮抗剂TNP-ATP(P1-4受体拮抗剂)和PPADS(P1,2,3,5,7受体拮抗剂)对慢性吗啡耐受大鼠痛敏的影响。2.观察鞘内注射嘌呤受体拮抗剂TNP-ATP和PPADS对慢性吗啡耐受大鼠脊髓P2X4R、OX-42、p-p38MAPK、BDNF表达的调节。方法114只成年雄性SD大鼠,质量250-300g,鞘内置管成功后,随机分为6组(n=18)。NS组：大鼠经鞘内置管注入生理盐水；MOR组：大鼠经鞘内置管并注入吗啡10μg；TNP-ATP组：大鼠经鞘内置管并注入TNP-ATP30nmol后注入吗啡10μg；TNP-ATP+NS组：大鼠经鞘内置管并注入TNP-ATP和生理盐水；PPADS组：大鼠经鞘内置管并注入PPADS30nmol后注入吗啡10μg;PPADS+NS组：大鼠经鞘内置管并注入PPADS和生理盐水。按各组处理,鞘内置管3d后开始分别鞘内输注生理盐水、吗啡、TNP-ATP和PPADS,鞘内注射5d后建立大鼠吗啡耐受模型,于1、3、5、7d测定大鼠的痛敏值,并在鞘内注射7d后取脊髓腰膨大部,Western Blot检测P2X4R、BDNF、p-p38MAPK蛋白表达,RT-PCR检测P2X4R、BDNF mRNA的表达,以及免疫组化测定P2X4R、OX42、p-p38MAPK、BDNF的表达。结果与MOR组比较, TNP-ATP组给药后第3-7天大鼠痛敏阈值增高,脊髓P2X4R、BDNF、OX42的表达明显下降。而PPADS组与MOR组比较大鼠痛敏阈值无明显差异,脊髓P2X4R、OX42、p-p38MAPK、BDNF的表达无明显差异。结论鞘内给予P1-4受体拮抗剂TNP-ATP能够明显延缓吗啡耐受的形成,同时下调脊髓P2X4R、BDNF、p-p38MAPK的表达和小胶质细胞活化,而鞘内给予P1,2,3,5,7受体拮抗剂PPADS对吗啡耐受没有明显作用,从而说明脊髓胶质P2X4R/p38MAPK/BDNF途径可能是参与吗啡耐受发生机制。