论文部分内容阅读
流行性感冒(Influenza),是由流感病毒(Influenza virus)引起的的人畜共患呼吸道传染病。近100年来，全球已经出现了数次不同型别流感病毒大流行，给人类生命财产安全造成极大的威胁。1918年的西班牙流感（H1N1亚型），造成了4000-6000万人死亡；1968年香港流感（H3N2亚型）夺取了约150万人的生命；而甲型H1N1流感自2009年3月在墨西哥暴发后迅速在全球流行，成为国际上重大公共卫生事件。近几年不同型别流感病毒交替、混合流行已经成为常态，正确判断流感病毒型别，对流行病学调查和疫情防控起着至关重要的作用。本研究采用多重逆转录扩增技术、基因芯片技术以及酪胺信号放大结合量子点标记银染增强的可视化显色技术，选取人流感病毒基因组中NA基因、HA基因、M基因的编码区为扩增靶区域，设计亚型特异性引物和探针，使用带有生物素标记的引物对靶基因进行多重逆转录扩增，将扩增产物与预先固定在醛基玻片上的流感病毒亚型特异性探针进行杂交反应，采用酪胺信号放大结合量子点标记银染增强技术显色，使探针呈现肉眼可见的信号，通过结果分析，对常见的甲型流感病毒（包括甲型H1N1流感病毒，季节性H1N1流感病毒，季节性H3N2流感病毒），乙型流感病毒进行分型检测。最终筛选出了5对特异性引物和5条特异性探针，优化了多重逆转录扩增体系、杂交反应和可视化显色条件，考察了基因芯片的检测性能，检测了18个甲型流感病毒（包括甲型H1N1流感病毒，季节性H1N1流感病毒，季节性H3N2流感病毒）和乙型流感病毒毒株，检测结果均为相应型别阳性，无交叉反应，检测10种其他常见呼吸道病毒，检测结果均为阴性，显示本方法特异性良好；应用本方法对各型别流感病毒重复5次进行检测，检测信号CV值均小于20%，重复性较好；通过与实时荧光定量PCR的比较实验确定了本方法对各型别流感病毒检测灵敏度均可达到103PFU/mL；应用本方法检测1247例临床样本，与测序方法的检测结果的总符合率为96.2%。本方法具有特异性强、灵敏度高、快速和高通量等特点，可以作为流感的流行病学调查以及临床诊断的一种新方法。