研究背景和目的体外受精-胚胎移植(IVF-ET)过程中,输卵管炎性病变如积液等可能影响宫腔环境及子宫内膜容受性,降低胚胎着床率和临床妊娠率,增加自然流产率和异位妊娠率。研究显示,IVF-ET前对积液输卵管进行处理,如手术结扎、切除输卵管或穿刺抽吸积液等,患者的继续妊娠率远高于未行任何干预的女性。目前,常规的积液输卵管处理方式有:开腹或腹腔镜下输卵管切除术、输卵管近端结扎术、输卵管远端造口术及阴道超声引导下输卵管积液穿刺抽吸术等。这些方法各有利弊,主要弊端有,切除或结扎输卵管可能因血管神经的损伤而影响卵巢功能,输卵管造口术和积液抽吸术容易复发;有些患者因各种原因不适合手术治疗等。本研究即探讨一种非手术处理积液输卵管、不影响卵巢功能、复发率低的方法。设定研究方向为采用一种新型配方的医用胶,通过栓堵方式阻断输卵管与子宫的交通,去除输卵管积液对胚胎着床的不利影响。关于IVF-ET前积液输卵管的栓堵,尚不属于常规处理方法,多为介入下机械性栓堵物如微弹簧圈的栓堵等。将此医用胶用于IVF-ET前积液输卵管的栓堵未见报道。为验证其有效性及安全性,本研究为前期动物实验。选择与人类输卵管管腔大小结构相近的新西兰兔子宫为研究对象,先通过注菌方式建立兔子宫积液模型,再应用α-氰基丙烯酸酯医用胶,对兔的积液子宫进行栓堵。术后通过子宫输卵管造影评价医用胶对兔积液子宫的堵塞效果,并观察栓堵后子宫、输卵管及卵巢的组织形态学变化、进行组织的免疫组化检测、凋亡检测和电镜观察等,评价此医用胶的栓堵效果及对兔子宫等器官组织的影响,以期为临床上IVF-ET前积液输卵管的处理提供实验依据。方法选择新西兰成年雌兔作为实验动物,建立兔子宫积液模型,再对积液子宫进行医用胶栓堵。为摒除兔动情周期不同时期激素对所观察指标的影响,对所有兔进行外阴粘膜观察和阴道脱落细胞学观察,判定动情周期,将研究的取材时间设定在兔的动情初-中期阶段。1.兔子宫积液模型的建立通过从兔阴门插管至阴道、宫颈及宫腔并开腹观察辅助的方式,向宫腔内注入菌液,建立兔子宫积液模型。所注菌液分别为1.5 ×108/ml金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌菌液及1:1混合的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌菌液;术后观察时间分别为1周、2周和3周。通过对不同时间积液子宫的大体形态学、组织学观察及肌层厚度比较,确定合适的菌液和观察时间建立兔子宫积液模型。2.医用胶栓堵兔积液子宫选择35只双侧子宫积液形成良好的兔,随机分为实验组(23只)和对照组(12只),另取12只正常兔(无子宫积液)作为空白对照组。通过兔阴门插管至阴道、宫腔并开腹辅助的方法,对兔积液子宫的近端进行医用胶栓堵。对照组和空白对照组仅行插管手术,不进行医用胶栓堵。每组再分为2个亚组,分别于术后1个月、6个月与术前比较体重变化;术后1个月、6个月实验组和对照组兔均行子宫输卵管造影检查,进行子宫腔栓堵率的比较。术后1个月和6个月,实验组分别各处死3只兔(均为双侧子宫腔均栓堵成功的兔);对照组和空白对照组各处死2只兔。观察子宫、输卵管和卵巢的组织学改变、比较子宫肌层厚度等。术后6个月兔再进行组织的雌孕激素受体测定和比较、凋亡检测及透射电镜观察等,以此综合评价医用胶对子宫腔的栓堵效果及对子宫等器官组织学变化的影响。结果1.兔子宫积液模型的建立造模成功的兔子宫明显扩张,内膜及肌层变薄,见炎细胞浸润。子宫肌层厚度,术后1周与术后2周和3周比较,均有统计学差异;术后2周与术后3周比较,无统计学差异。术后2周子宫积液形成程度可以满足实验要求。结合注入菌液情况,认为注入1.5×108/ml金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌1:1混合菌液组,于术后2周可建立良好的子宫积液模型。2.积液子宫的医用胶栓堵(1)兔存活情况及体重变化:35只子宫积液兔中成功进行医用胶栓堵手术且术后正常存活的有31只,实验组20只,对照组11只。两组死亡率无统计学差异;术后1个月和6个月,实验组和对照组兔体重均有增加,两组比较均无统计学差异。实验组术后1个月及6个月分别与术前体重比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)子宫输卵管造影:实验组术后1个月,子宫堵塞率95.00%;术后6个月,子宫堵塞率85.00%。对照组术后1个月和6个月,堵塞率为0。实验组和对照组比较,子宫堵塞率有统计学差异(P<0.05)。实验组不同时间点组内比较,子宫堵塞率无统计学差异。(3)大体观察:对照组积液子宫增粗,扩张;输卵管及卵巢无明显改变。实验组栓堵即时子宫腔略增粗,表面光滑;术后1个月,栓堵部位长度略缩小,皱缩质硬,子宫腔内见胶聚合体;术后6个月,栓堵部位子宫明显皱缩;输卵管卵巢无明显改变;积液部位子宫无明显改变。(4)组织形态学:分别观察空白对照组正常子宫、对照组积液子宫、对照组积液部位近端子宫、实验组栓堵部位子宫、实验组栓堵部位近端子宫等。子宫:对照组术后1个月和6个月,积液子宫明显扩张,内膜变薄,内膜下见炎细胞浸润。积液部位近端子宫,子宫内膜明显增厚,内膜固有层内血管扩张、充血,内膜上皮下可见散在的炎细胞浸润。实验组栓堵后1个月,栓堵部位子宫腔扩张,腔内可见大量丝网状物(胶聚合体),粘膜上皮见紊乱的复层上皮细胞、或有局部上皮缺失,见少量炎细胞浸润及纤维化。栓堵部位近端子宫,子宫内膜呈单层立方状上皮,固有层散在极少量嗜酸性粒细胞,未见明显病理学改变。实验组栓堵后6个月,栓堵部位镜下结构杂乱模糊,子宫内膜正常结构消失,无明显上皮组织,见肉芽组织增生及纤维化。栓堵部位近端子宫,术后1个月与术后6个月的组织形态学类似,均无明显病理学改变。子宫肌层厚度比较,实验组术后1个月,子宫肌层变薄,与术后6个月比较有统计学差异(P<0.05);术后1个月实验组与对照组比较有统计学差异(P<0.05),术后6个月无统计学差异。余无明显病理学变化。输卵管:对照组和实验组,输卵管外膜血管扩张、充血,腔内见少量炎细胞浸润等。余无明显病理学变化。卵巢:各组均无明显病理学改变。(5)雌孕激素受体(ER、PR)测定与凋亡检测:子宫ER、PR测定及凋亡检测显示,积液子宫、栓堵部位子宫、积液部位近端子宫ER表达减弱,PR表达增强;凋亡表达增强。正常子宫与积液子宫、正常子宫与栓堵部位子宫、正常子宫与积液部位近端子宫ER、PR测定平均光密度值、凋亡检测平均光密度值均有统计学差异,栓堵部位近端子宫与积液部位近端子宫ER比较有统计学差异;其余比较均无统计学差异。输卵管ER、PR测定及凋亡检测显示,与空白对照组输卵管比较,实验组输卵管ER表达减弱,平均光密度值测定有统计学差异;对照组和实验组输卵管PR表达均增强,与空白对照组比较平均光密度值测定均有统计学差异。其余比较均无统计学差异。凋亡检测平均光密度值均无统计学差异。卵巢ER、PR测定及凋亡检测显示,各组比较均无统计学差异。(6)透射电镜观察:积液子宫显示上皮细胞肿胀、微绒毛缺失,细胞器如线粒体等出现空泡化。栓堵后子宫,结构紊乱,细胞核染色质减少、呈核溶解状态,可见吞噬细胞等。对照组和实验组输卵管细胞器如线粒体、内质网等轻微空泡化。各组卵巢各类细胞和细胞器结构清晰正常,偶见线粒体损伤。结论1.通过阴道插管并开腹手术辅助的方式向兔子宫腔内注入1.5×108/ml的1:1混合的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌菌液,2周左右时间可建立较为稳定的子宫积液模型。2.医用胶能有效栓堵兔积液子宫,对兔健康存活无不良影响;栓堵对兔子宫的主要影响即栓堵部位的组织压迫及粘连改变,对周围组织及器官无明显有害影响;栓堵后子宫、输卵管及卵巢的组织学、免疫组化、凋亡及电镜观察结果显示,栓堵不影响受体表达,可以有效去除积液对宫腔的不良影响,有利于宫腔环境的改善;栓堵对卵巢无明显影响。3.兔子宫与人类输卵管的管腔大小和组织结构相近,故兔子宫可以作为人类输卵管的研究模型。对医用胶栓堵兔子宫可行性、有效性和不良影响的研究显示,医用胶用于人类IVF-ET前积液输卵管的栓堵具有可行性。