一株分离自剑川鼠疫疫源地中鼠疫噬菌体生物学及基因组学特性的研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:triyve
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[目的]查明云南剑川鼠疫疫源地分离出的一株野生型鼠疫噬菌体(命名为JC221)的生物学特性和基因组学特征,为探究鼠疫菌与鼠疫噬菌体在其疫源地中的微生态及协同进化奠定基础。[方法]以JC221为研究对象,采用倍比稀释法和双层琼脂平板法对该噬菌体进行纯化,利用透射电镜观察形态特征,测定裂解特性、宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、稳定性等生物学特性,并进行全基因组测序及相关分析。[结果]1、JC221是一株烈性噬菌体,噬斑中心和边缘均清晰、大小均一(直径在1-1.5mm),在电镜下形态呈蝌蚪形,头部形状为正多面体结构,有一收缩性的尾鞘,为一株肌尾型噬菌体。2、JC221在28℃、37℃均可全部裂解被试鼠疫菌株,在28℃时还可裂解大肠埃希菌标准株ATCC25922,在37℃时还能裂解部分志贺氏菌属菌株。3、JC221对鼠疫菌的最佳感染复数(MOI)为0.1,潜伏期约为30min,隐蔽期为20min,裂解期约为50min,裂解量为20.8,活性不受氯仿影响;具有较好的热稳定性,对乙醇、异丙醇和紫外线照射都比较敏感,而在过酸或过碱环境下均无法存活。4、JC221为双链DNA噬菌体,基因组全长1 74,931bp,G+C 含量为41.23%,预测编码基因274个,有103种已知功能基因产物,含两个tRNA基因,GC偏倚正值和负值有明显的交界处;在基因注释预测结果中未发现噬菌体溶原模块,抗生素抗性基因或推定的毒力因子。该噬菌体大概有14个结构蛋白,同时通过预测基因产物的分析,发现其功能主要分为三个模块:核苷酸代谢和复制、结构和包装以及裂解。5、JC221的基因组序列与其他耶尔森氏菌噬菌体的基因组序列相似性低(<1%一致性)。末端酶大亚基序列系统发育树分析显示,JC221和耶尔森氏菌噬菌体PYPS2T、phiD1和PST属于同一簇,但不属于任何分支,与分析的其他噬菌体均相距甚远。6、JC221的全基因组序列及其详细的注释信息已提交给NCBI的GenBank数据库,登录号为:MN50881 7.1。[结论]JC221为烈性噬菌体,属于肌尾噬菌体科,其衣壳内不含脂类物质,属多宿主噬菌体,基因组分析表明它是一株全新鼠疫噬菌体,其生态学意义值得进一步探讨。
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