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本文研究主要针对同一环境下不同免疫状态鱼肠道微生物群落进行分析,并研究肠道免疫方面相关的补体C9基因,探讨肠道微生物、补体基因与鱼类免疫的相互联系与影响。将健康半滑舌鳎经以下处理并分组,即CG(注射PBS对照组)、VAHG(灭活鳗弧菌感染有病症组)、VANG(灭活鳗弧菌感染抗病组)、HOSG(自然养殖有病症组)、NOSG(自然养殖抗病组)共五组样品。对不同组肠道微生物构建文库并进行16S rRNA测序,通过高通量测序配合生物信息学分析,完成5组不同免疫状态肠道样品中微生物种群数据库的构建和微生物种群分析,共获得了27,475个不同微生物。已知的微生物种类为6550个,分别属于58个门,154个纲,241个目,313个科,609个属。其中健康样品(CG)肠道微生物种属丰富度为易感病组(VAHG与HOSG)的1.5-2倍,共有21个门的微生物为所有组共有。微生物代谢通路分析发现,这些微生物共参与了 123个不同的代谢通路,其中存在45个可能与疾病代谢通路相关的微生物种类。在病原刺激半滑舌鳎后,肠道中补体C9基因表达量升高,猜测其与肠道免疫存在联系,本文研究获得半滑舌鳎C9基因(CsC9)的cDNA全长,CsC9的cDNA全长2148bp,编码区为1548bp,编码516个氨基酸。序列分析可得其相对分子量为57.12kD,等电点为5.65;CsC9蛋白包含一个信号肽,具有含有TSP1、LDLa和MACF这三个主要结构域;半滑舌鳎C9与牙鲆C9的同一性最高为66%;系统进化树显示鱼类的C9首先聚为一支,然后再与高等脊椎动物聚在一起。CsC9基因在所有健康组织中均有广泛表达,在肝中表达水平最高,其次表达量较高为脾脏、性腺。在感染后六种免疫组织中CsC9均呈现上调表达趋势,头肾、肠、肝脏中表达量上调趋势明显。并且CsC9在五组不同免疫状态半滑舌鳎肠的表达量不同,这说明CsC9基因与肠道微生物存在一定联系。在CsC9的蛋白水平上,本文成功构建pET-32a-CsC9重组载体,并获得了重组蛋白,蛋白大小为72.2kD。并采用重组C9蛋白感染感染体外培养的免疫细胞,下游基因补体受体CD59、CR1和CR2均表现为上调趋势。说明了 CsC9基因在半滑舌鳎免疫应答中有重要作用。