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目的:探索利用人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)与生物基质体外预制“人工羊膜”,并对“人工羊膜”进行体外立体培养。方法:采用双酶消化法分离提取hAMSCs,并行贴壁培养、纯化传至P3代,运用流式细胞术对hAMSCs进行鉴定;用于后续与BD基质胶(BD-matrigel,BDM)混合制备“人工羊膜”。用混合法按体积1:1比例将干细胞与BDM结合,制成底面积为2 cm~2,厚约3-5 mm,浓度为3×10~5/mL的圆形薄膜,即“人工羊膜”,将其置于三维的培养体系中培养(实验组);同期将3×10~5/mL浓度,不含BDM的hAMSCs置于相同培养体系中(对照组)。在hAMSCs培养的第1、4、7 d时,分别在普通光学显微镜下观察两种不同培养方式下细胞的生长状态及形态变化。使用AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡试剂盒对实验组和对照组中的hAMSCs进行染色,用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)上机检测,计算出AnnexinV-FITC/PI阳性细胞比例,检测细胞凋亡率。应用ELISA检测试剂盒检测两组细胞分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的能力。结果:细胞形态学观察发现,对照组hAMSCs在原代培养后48 h左右开始完全贴壁生长,7 d时融合度可达90%以上,传至第三代呈均一长梭形、“鸟巢状”生长;实验组hAMSCs则呈现均匀分布且成球生长;两组细胞大部分表现生长良好,漂浮细胞较少见。hAMSCs呈高表达CD44、CD73、CD90以及CD105,而CD45/34/11b/19/HLA-DR呈低表达。经Annexin-V染色后,用流式细胞检测结果显示:实验组与对照组细胞平均凋亡率分别为2.91%、4.91%,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA结果显示实验组间充质干细胞VEGF分泌量与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:人羊膜间充质干细胞在以BDM为支架的“人工羊膜”中可以存活,并具有良好分泌VEGF的能力。