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目的:建立大叶钩藤药材钩藤碱含量测定和指纹图谱测定的方法:科学评价广西大叶钩藤植物不同产地、不同药用部位和不同采收期的药材质量。为控制大叶钩藤药材质量,充分合理利用大叶钩藤植物资源提供试验依据。
方法:(1)采用HPLC法对21批广西不同产地、不同药用部位和其中3个产地不同采收期大叶钩藤进行钩藤碱含量测定。
色谱条件:色谱柱:GeminiC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-水(含0.002mol/L三乙肢,冰乙酸调pH至7.5)((64: 36);流速:1.OmL/min;检测波长:254nm;柱温:室温:进样量:20μL。
供试品溶液制备:取大叶钩藤粉末(过60目筛)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇15mL,密塞,称定重量。超声处理40mino取出,放冷晾干,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
(2)采用HPLC法对18批广西不同产地、不同药用部位和其中1个产地不同采收期大叶钩藤进行指纹图谱测定。
色谱条件:色谱柱:GeminiC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-水(含0.002mol/L三乙胶,冰乙酸调pH主7.5)梯度洗脱:流速:1.0mL/min;检测波长:254nm;柱温:30℃;进样量:20μL。
供试品溶液制备:取大叶钩藤粉末(过60目筛)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%乙醇15mL,密塞,称定重量。超声处理40min。取出,放冷晾干,再称定重量,用75%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
结果:(1)不同产地大叶钩藤药材钩藤碱含量有一定差异,各产地钩藤碱含量在O.143%~0.642%范围内;各产地5个药用部位钩藤碱平均含量中,带钩茎枝、无茎枝钩、无钩茎枝和主杆差异不大,分别为:0.386%、O.375%、O.393%和0.351%,叶的含量大于其余部位,为0.483%;相同产地不同采收期大叶钩藤钩藤碱的动态积累稍有差异。
(2)不同产地大叶钩藤药材指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为O.909~0.998,均>0.9;不同部位大叶钩藤药材指纹图谱与对照指纹图谱的相似度分别为带钩茎枝O.909~0.998;无茎枝钩O.883~0.997;无钩茎枝O.871~O.999;主杆O.877~0.998和叶0.917~0.992;相同产地不同采收期大叶钩藤药材指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为O.975~0.997,均>0.9。计算了各样品共有峰中的六强峰排列顺序和相对总面积值。
结论:(1)建立了大叶钩藤药材钩藤碱含量测定和指纹图谱测定的方法,经方法学考察证实,本实验确定的含量测定方法及指纹图谱检测方法均具有良好的精密度、稳定性、重复性,可以用于大叶钩藤药材的质量控制。
(2)广西不同产地大叶钩藤药材均含钩藤碱成分,且含量均较高,但含量随产地不同而异,大叶钩藤可能是广西钩藤属药用植物的优势品种:大叶钩藤的带钩茎枝、无茎枝钩、无钩茎枝、主杆和叶等部位均含钩藤碱成分,除了叶的含量较高外,其余各部位含量差异不大,具有进一步开发利用的价值,应物尽其用:同一植株不同采收期大叶钩藤钩藤碱的动态积累稍有差异,但变化无规律,说明大叶钩藤药材一年四季均可采集。
(3)建立了广西不同产地、不同药用部位及不同采收期大叶钩藤的标准指纹图谱,以钩藤碱峰作为内参照峰,确定7个共有峰作为整体指纹特征。总体来说,不同产地、不同药用部位及不同采收期大叶钩藤样品相似度均较高。这表明广西大叶钩藤样品之间以及同一植株、不同采收期大叶钩藤的指纹图谱具有较好的-致性。各样品共有峰中的六强峰排列顺序和相对总面积值说明含量较高的主要化学组分的含量差异不大,大部分主要化学成分含量相似,质量较稳定。
方法:(1)采用HPLC法对21批广西不同产地、不同药用部位和其中3个产地不同采收期大叶钩藤进行钩藤碱含量测定。
色谱条件:色谱柱:GeminiC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-水(含0.002mol/L三乙肢,冰乙酸调pH至7.5)((64: 36);流速:1.OmL/min;检测波长:254nm;柱温:室温:进样量:20μL。
供试品溶液制备:取大叶钩藤粉末(过60目筛)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇15mL,密塞,称定重量。超声处理40mino取出,放冷晾干,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
(2)采用HPLC法对18批广西不同产地、不同药用部位和其中1个产地不同采收期大叶钩藤进行指纹图谱测定。
色谱条件:色谱柱:GeminiC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-水(含0.002mol/L三乙胶,冰乙酸调pH主7.5)梯度洗脱:流速:1.0mL/min;检测波长:254nm;柱温:30℃;进样量:20μL。
供试品溶液制备:取大叶钩藤粉末(过60目筛)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%乙醇15mL,密塞,称定重量。超声处理40min。取出,放冷晾干,再称定重量,用75%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
结果:(1)不同产地大叶钩藤药材钩藤碱含量有一定差异,各产地钩藤碱含量在O.143%~0.642%范围内;各产地5个药用部位钩藤碱平均含量中,带钩茎枝、无茎枝钩、无钩茎枝和主杆差异不大,分别为:0.386%、O.375%、O.393%和0.351%,叶的含量大于其余部位,为0.483%;相同产地不同采收期大叶钩藤钩藤碱的动态积累稍有差异。
(2)不同产地大叶钩藤药材指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为O.909~0.998,均>0.9;不同部位大叶钩藤药材指纹图谱与对照指纹图谱的相似度分别为带钩茎枝O.909~0.998;无茎枝钩O.883~0.997;无钩茎枝O.871~O.999;主杆O.877~0.998和叶0.917~0.992;相同产地不同采收期大叶钩藤药材指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为O.975~0.997,均>0.9。计算了各样品共有峰中的六强峰排列顺序和相对总面积值。
结论:(1)建立了大叶钩藤药材钩藤碱含量测定和指纹图谱测定的方法,经方法学考察证实,本实验确定的含量测定方法及指纹图谱检测方法均具有良好的精密度、稳定性、重复性,可以用于大叶钩藤药材的质量控制。
(2)广西不同产地大叶钩藤药材均含钩藤碱成分,且含量均较高,但含量随产地不同而异,大叶钩藤可能是广西钩藤属药用植物的优势品种:大叶钩藤的带钩茎枝、无茎枝钩、无钩茎枝、主杆和叶等部位均含钩藤碱成分,除了叶的含量较高外,其余各部位含量差异不大,具有进一步开发利用的价值,应物尽其用:同一植株不同采收期大叶钩藤钩藤碱的动态积累稍有差异,但变化无规律,说明大叶钩藤药材一年四季均可采集。
(3)建立了广西不同产地、不同药用部位及不同采收期大叶钩藤的标准指纹图谱,以钩藤碱峰作为内参照峰,确定7个共有峰作为整体指纹特征。总体来说,不同产地、不同药用部位及不同采收期大叶钩藤样品相似度均较高。这表明广西大叶钩藤样品之间以及同一植株、不同采收期大叶钩藤的指纹图谱具有较好的-致性。各样品共有峰中的六强峰排列顺序和相对总面积值说明含量较高的主要化学组分的含量差异不大,大部分主要化学成分含量相似,质量较稳定。