下调ERRα表达对子宫内膜癌细胞作用的研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:oyxz1988
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目的检测雌激素受体相关受体α(Estrogen Receptor-related Receptorα,ERRα)特异性拮抗剂XCT790干预和si RNA靶向干扰ERRα基因在RL952、AN3-CA和HEC-1A、HEC-1B细胞中的表达情况,探讨ERRα表达水平与子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的相关性。方法体外培养四株子宫内膜癌细胞,其中以RL952、AN3-CA细胞(ER+,ERR+)为Ⅰ型子宫内膜癌体外模型,以HEC-1A、HEC-1B细胞(ER-,ERR+)为Ⅱ型子宫内膜癌体外模型,采用q PCR和Western blot技术检测四株子宫内膜癌细胞在ERRα特异性拮抗剂XCT790干预前后细胞ERRαm RNA和蛋白表达水平的变化情况,并应用MTT技术及流式细胞术检测XCT790干预下四株子宫内膜癌细胞的增殖、凋亡情况;构建ERRα基因si RNA慢病毒载体,采用si RNA干扰技术,对ERRα均表达的四株内膜癌细胞进行瞬时转染,从而达到抑制ERRα基因表达的目的,采用q PCR和Western blot技术,检测si RNA干扰作用下ERRα表达的改变;并采用MTT和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡情况。结果1.RL952、AN3-CA细胞ERRαm RNA表达量显著高于HEC-1A、HEC-1B细胞(P<0.05)。ERRα蛋白在RL952、AN3-CA中均呈较高表达,而在HEC-1A、HEC-1B中均呈较低表达,与m RNA水平相吻合。2.采用10-5M、10-6MXCT790分别干预RL952和HEC-1A细胞24小时,建立药物处理组(XCT790,XCT),以加入正常培养基和药物溶剂DMSO分别为空白对照组(Control,CON)和阴性对照组(Negative control,NC)。在以上两株子宫内膜癌细胞中,10-5MXCT790较10-6MXCT790抑制ERRαm RNA表达效果更显著(P<0.05)。3.采用10-5MXCT790分别干预RL952和HEC-1A细胞24小时、48小时,以上两株子宫内膜癌细胞被10-5MXCT790干预24、48小时后ERRαm RNA表达均明显受到抑制(P<0.05)。4.10-5MXCT790干预24小时后,四株子宫内膜癌细胞XCT组较NC组ERRαm RNA表达显著下降(P<0.05),ERRαm RNA表达量分别减少了32.21%RL952、40.73%AN3-CA、22.76%HEC-1A、20.32%HEC-1B。药物处理后四株子宫内膜癌细胞ERRα蛋白表达与m RNA表达趋势一致。5.10-5MXCT790干预24小时、48小时、72小时、96小时后,各株子宫内膜癌细胞XCT组较NC组、CON组的生长抑制率均有显著性升高(P<0.05),分别为RL952(39.67%24h,40.71%48h,43.66%72h,54.25%96h),AN3-CA(9.33%24h,17.71%48h,25.28%72h,33.12%96h),HEC-1A(20.66%24h,32.65%48h,43.27%72h,44.74%96h),HEC-1B(49.19%24h,57.75%48h,59.43%72h,62.50%96h)。呈时间依赖性。6.10-5MXCT790干预24小时后,四株子宫内膜癌细胞XCT组较NC组凋亡率均显著升高(P<0.05)。7.采用ERRα基因si RNA慢病毒载体(ERRα-Si RNA-75E)建立ERRα低表达组(Knock down,KD),以加入正常培养基和阴性慢病毒载体(ERRα-Si RNA-NO53)分别为空白对照组(Control,CON)和阴性对照组(Negative control,NC)。RNA干扰24小时后,各株细胞KD组ERRαm RNA表达明显受到抑制(P<0.05)。四株子宫内膜癌细胞RNA干扰后ERRα蛋白表达与m RNA表达趋势一致。8.si RNA干扰24小时、48小时、72小时、96小时后,各株子宫内膜癌细胞KD组较CON组、NC组的生长抑制率均有显著性升高(P<0.05),分别为RL952(48.14%24h,57.18%48h,85.70%72h,62.22%96h),AN3-CA(28.46%24h,36.21%48h,44.34%72h,30.12%96h),HEC-1A(51.36%24h,52.51%48h,82.01%72h,49.00%96h),HEC-1B(38.28%24h,58.12%48h,67.46%72h,53.46%96h)。呈时间依赖性。9.si RNA干扰各株子宫内膜癌细胞KD组较CON组、NC组的凋亡率均显著升高(P<0.05)。结论1.XCT790可以特异性下调子宫内膜癌细胞ERRα基因的表达,抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡。XCT790作为ERRα特异性拮抗剂,有望为临床治疗子宫内膜癌新思路。2.应用RNAi技术特异性下调ERRα基因表达水平,可以抑制子宫内膜癌细胞的增殖,促进凋亡。
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