【摘 要】
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本研究以32份芸薹属蔬菜种质为材料,其中包括11份甘蓝类蔬菜,11份白菜类蔬菜,10份芥菜类蔬菜,采用三种方法提取芸薹属蔬菜种子的DNA,探索出简单、快速、高效的,并适用于SSR分
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本研究以32份芸薹属蔬菜种质为材料,其中包括11份甘蓝类蔬菜,11份白菜类蔬菜,10份芥菜类蔬菜,采用三种方法提取芸薹属蔬菜种子的DNA,探索出简单、快速、高效的,并适用于SSR分子标记分析的DNA提取方法;进一步采用31对SSR引物进行芸薹属蔬菜种质的鉴定与分析,试图找到芸薹属三大类蔬菜种间的特异性片段,并明确芸薹属蔬菜种质间的亲缘关系;最后克隆和测序芸薹属蔬菜种间的特异性片段,并进行序列分析,主要结果如下:1.通过比较三种不同的方法(SDS法、CTAB法、NaOH法)提取出的22份芸薹属蔬菜种子DNA的质量,结果发现:SDS法提取出的种子DNA质量最好,完整性高,OD260/OD280的平均值为1.873,与CTAB法提取出的叶片DNA(OD260/OD280比值1.802-1.906)效果相当;CTAB法次之,其OD260/OD280平均值为1.600; NaOH法提取出的种子DNA质量最差,OD260/OD280值均低于1.3。2.应用SSR标记,对32份芸薹属蔬菜中三大类蔬菜(白菜(Brassica rapa)甘蓝(Brassica oleracea)、芥菜(Brassica juncea))种间的特异性、种内的多态性及亲缘关系进行分析。从31对引物中筛选出21对多态性引物,共扩增出113条清晰、稳定的多态性条带。引物MF4、SSRRAS46、P004和NA3分别在甘蓝类蔬菜、白菜类蔬菜、芥菜类蔬菜中有特异性条带,通过10份验证性材料验证,其结果完全一致。21对多态性引物的平均PIC值为0.604,引物B01可分别区分5个甘蓝品种、8个白菜品种,JU5可区分开5份芥菜品种。系统聚类分析将22份芸薹属蔬菜种质分为两大类群:甘蓝类蔬菜为一类,白菜类和芥菜类蔬菜为一类,bootstrap值高达100%。在相似系数0.29处,白菜类蔬菜和芥菜类蔬菜分别聚为两亚类。主坐标分析与系统聚类分析结果一致。3.对芸薹属蔬菜种间的特异性片段进行克隆与测序,进一步作序列分析,结果为,引物MF4在甘蓝中特异片段大小为140bp,引物SSRRAS46在白菜中特异片段大小为194bp,NA3和P004在芥菜中的特异性片段大小分别是207bp和213bp。对序列进行BLAST,可知序列与原序列的同源性为98%、100%,与其它序列的同源性也较高,达85%-96%。
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