目的利用细胞生物学、分子生物学和蛋白质组学等技术研究丹参酮ⅡA对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)细胞损伤的保护作用及其分子机制,并构建丹参酮ⅡA作用相关的蛋白质相互作用网络,为丹参酮ⅡA的临床应用提供实验基础,同时为中药多靶点抗AS作用的研究提供实验平台。方法体外培养HUVEC,利用MTT法确定ox-LDL和丹参酮ⅡA的最佳作用浓度,并用不同浓度的丹参酮ⅡA和ox-LDL处理HUVEC细胞24 h。①利用流式细胞仪检测HUVEC细胞中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量。②检测HUVEC细胞内丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性的变化。③利用双向荧光差异凝胶电泳(Two dimension difference gel electrophoresis,2D-DIGE)结合质谱鉴定技术筛选并鉴定丹参酮ⅡA作用前后差异表达的蛋白质。④利用BioPUBINFO网站建立蛋白质相互作用网络。结果①与正常组比较,0-8 mmol/L丹参酮ⅡA对HUVEC细胞增殖无影响(P>0.05),浓度大于50 mg/L的ox-LDL对细胞增殖具用显著的抑制作用(P<0.05)。②经过流式细胞仪检测,ox-LDL诱导HUVEC细胞中ROS含量显著增加(P<0.01),而不同浓度丹参酮ⅡA作用后,随着其浓度的增加ROS含量逐渐降低。③丹参酮ⅡA作用后,与ox-LDL组相比,MDA含量下降,而SOD活性提高(P<0.05)。④蛋白质组学实验表明:8 mmol/L丹参酮ⅡA作用后,ox-LDL损伤的HUVEC细胞中29个蛋白质表达发生变化,通过建立的蛋白质相互作用网络图筛选出1 1个关键节点进行功能分析,发现这些节点主要涉及细胞代谢、氧化磷酸化作用、细胞组分及细胞骨架。结论①50 mg/L的ox-LDL作用HUVEC细胞24 h,能成功建立内皮细胞损伤模型。②丹参酮ⅡA能够显著降低受损内皮细胞内ROS和MDA含量,以及提高SOD活性,表明丹参酮ⅡA能显著增强HUVECs抵御氧化损伤的能力。③结合蛋白质相互作用网络图谱分析丹参酮ⅡA主要通过调节细胞中氧化磷酸化途径和抗炎抗氧化方面保护内皮细胞。