临床前药代动力学研究的目的是阐明新药在体内吸收、分布、代谢和排泄的过程和特点,提供一些重要的药动学参数,为设计和优化临床研究给药方案提供理论依据,确保临床用药的安全性和合理性。多西他赛(docetaxel)为天然产物紫杉醇(paclitaxel)的结构类似物,是目前最有效的抗肿瘤药物之一。尽管如此,由于药物本身的急性毒性以及药物载体在体内降解后产生的毒性,依然有不少病人在接受多西他赛注射剂化疗时发生程度不等的毒副反应。因此,设计改良更为安全方便的药物载体对多西他赛的临床应用前景显得尤为迫切。国内外关于紫杉醇的新型载体报道已取得了一些具有应用价值的结果,诸如乳剂、凝胶剂、纳米粒以及脂质体等,而关于多西他赛的剂型改造鲜有报道。鉴于此,中科院上海药物所制备了一系列新型的多西他赛纳米注射剂(纳米粒、纳米脂质体、纳米乳剂),旨在降低药物急性毒性,提高机体耐受性,并且保持与市售普通注射液相同的抗肿瘤活性。本研究建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,使用8道移液器,以96孔板对血样及组织样品进行液液萃取前处理,测定生物样品中多西他赛浓度,并以普通多西他赛注射液作为参比制剂,对这一系列新型的多西他赛纳米注射剂进行临床前药代动力学研究,为临床药代动力学研究提供试验依据。一、生物样品中多西他赛定量分析方法的建立本文采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法测定生物样品(血浆、组织)中多西他赛的浓度,生物样品及内标紫杉醇置于96孔板中,采用8道移液器取液进行高通量的液液萃取。色谱柱为Ultimate XB C-8(50 mm×4.6 mm,5μm),流动相为含0.01%甲酸的甲醇-水溶液(90:10,V:V),单样品分析时间3 min。采用电喷雾离子化(ESI),以选择反应监测(SRM)方式进行正离子检测。用于定量分析的离子分别为m/z 830.0→549.0(多西他赛)和m/z 876.0→591.0(内标,紫杉醇)。多西他赛的血浆样品线性范围为1～500 ng/mL,组织样品线性范围为1～1000 ng/ml,最低定量限均为1 ng/mL,提取回收率均大于95%,批内、批间精密度(RSD)均小于15%。该方法灵敏、准确、专一、简便并且实现高通量分析,成功用于多西他赛纳米注射剂与普通注射剂的药代动力学比较研究。二、多西他赛纳米注射剂在Beagle犬体内的药代动力学研究6条Beagle犬(雌雄各半)单剂量静脉注射给药5 mg/Kg,按受试、对照剂型随机分成两组进行交叉给药,其间经过1周清洗期。一组给药新型多西他赛纳米注射剂(纳米粒/纳米脂质体/纳米乳剂),另一组给药多西他赛普通注射剂。于给药后不同时间点取血,用上述建立的LC-MS/MS方法测定血浆中多西他赛的浓度(其中超过线性范围高浓度血浆样品需经Beagle犬空白血浆稀释),根据所得的血浆药物浓度-时间曲线,采用非房室模型推算药动学参数。结果表明,给药多西他赛新型纳米注射剂后,体内的多西他赛的消除半衰期和平均驻留时间均大于给药普通多西他赛注射剂,药时曲线下面积小于给药普通制剂,清除率与给药普通制剂后相当。药时曲线显示,给药多西他赛新剂型初期,血药浓度较给药普通注射剂后要低,约在2 h后,血药浓度大于给药普通多西他赛注射剂,延长了药物在体内循环时间,在一定程度上减轻了药物急性毒性,提高了机体耐受性。三、多西他赛纳米注射剂在SD大鼠体内的药代动力学与组织分布研究SD大鼠单剂量静脉注射给药多西他赛纳米注射剂(纳米粒/纳米脂质体/纳米乳剂)和普通多西他赛注射剂10 mg/Kg进行药代动力学和组织分布研究,药品临用前用注射级生理盐水溶解稀释,按0.5 ml/Kg容量尾静脉缓慢注射给药(推注速度约为1 ml/min)。SD大鼠按体重随机分成两组,每组6只,雌雄各半。一组给药多西他赛纳米注射剂,一组给药普通多西他赛注射剂。然后同法在不同时间点进行取血,按SD大鼠血浆样品预处理方法操作(其中超过线性范围高浓度血浆样品需经SD大鼠空白血浆稀释),测定血浆中多西他赛浓度。组织分布试验选取50只大鼠,按受试、对照随机分成两组,每组25只大鼠再随机平均分为5组。分别于给药后的0.5、1、2、4、8h取一组大鼠(5只),断头处死,取心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉主要器官,按照SD大鼠组织样品前处理方法操作,测定组织中多西他赛的浓度。结果表明,多西他赛纳米注射剂延长了多西他赛的消除半衰期,增大了AUC并且减小了清除率;药时曲线显示,多西他赛新剂型可以在较长时间内保持一定的浓度,说明多西他赛纳米注射剂一定程度上延长了药物在体内的作用时间。组织分布结果显示,给药新剂型后多西他赛较快分布到了肝、脾、肺、肾等网状内皮系统(RES)器官中。从分布趋势看,给药多西他赛纳米注射剂后体内多西他赛在各组织的分布较给药普通制剂迅速。可见,较为迅速的组织分布使得肝、脾等网状内皮系统作为药物的贮库将药物缓慢释放回血液中,从而使多西他赛纳米注射剂给药后2～3小时的血药浓度高于多西他赛普通注射剂对照组,这可能是多西他赛纳米注射剂给药后能保持较长时间血药浓度的原因。