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目的血管新生和免疫受抑是肿瘤发生的重要生物学机制。肿瘤患者体内多存在免疫缺陷或功能受损,肿瘤细胞通过多种细胞和分子机制逃避机体的抗肿瘤免疫反应,其中树突状细胞(DC)分化异常和对T细胞刺激能力的下降是导致肿瘤免疫逃逸的重要因素。血管内皮生长因子(VEGF)是主要的促血管新生因子,肿瘤细胞过量分泌的VEGF除了具有促血管新生活性外,还可通过抑制造血祖细胞来源的DC的分化而发挥免疫抑制作用。基于VEGF促血管新生活性和免疫抑制的双重作用,本研究拟应用siRNA阻断VEGF活性达到抗肿瘤血管新生的同时改善肿瘤免疫状态,同时应用体外诱导正常DC的联合抗瘤作用,观察这种联合是否能够增强体外抗瘤效果,为临床抗肿瘤血管新生联合DC免疫治疗提供实验依据。方法以MCF-7乳腺癌细胞为观察对象,体外设计合成靶向VEGF的siRNA,采用siRNA技术靶向抑制MCF-7细胞VEGF基因的表达,观察siRNA基因沉默效果及对靶细胞的影响;分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),在一定细胞因子组合下诱导、培养DC;模拟肿瘤体内环境,添加MCF-7乳腺癌细胞培养上清培养DC,观察MCF-7乳腺癌细胞培养上清对正常外周血单个核细胞诱导的DC分化、成熟及功能的影响,探讨肿瘤机体内DC的免疫抑制状态;观察VEGF下调后MCF-7乳腺癌细胞培养上清对正常外周血单个核细胞诱导的DC分化、成熟及功能的影响的变化,探讨阻断VEGF活性对于改善DC功能的作用;进一步探讨靶向MCF-7细胞VEGF基因的siRNA和负载肿瘤抗原的DC二者联合对MCF-7细胞的抗瘤效果。结果设计合成的siRNA转染MCF-7细胞后VEGF mRNA和蛋白表达水平明显减低,同时抑制了靶细胞的增殖;在体外应用粒-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF),白介素-4(IL-4)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)能有效培养人外周血单个核细胞来源的DC;MCF-7乳腺癌细胞培养上清能够明显抑制正常外周血单个核细胞诱导的树突状细胞的分化成熟及抗原提呈能力,CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达明显降低(p＜0.01),DC致敏的CTL对MCF-7细胞杀伤活性及IL-12分泌和共刺激T淋巴细胞所分泌的IFN-γ明显降低(p＜0.01);干扰VEGF基因后MCF-7乳腺癌细胞培养上清对DCs的影响明显降低,CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达显著升高,DC致敏的CTL对MCF-7细胞杀伤活性及IL-12分泌和共刺激T淋巴细胞所分泌的IFN-γ明显升高(p＜0.01);靶向VEGF基因的siRNA和DC联合应用可显著抑制肿瘤细胞生长,细胞几乎完全溶解,细胞杀伤率达99%。结论体外设计合成的双链siRNA能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞VEGF基因的表达,抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞的凋亡;MCF-7乳腺癌细胞上清明显抑制外周血单个核细胞诱导培养的树突状细胞的分化、成熟及抗原提呈能力。下调VEGF后的MCF-7细胞上清对DCs的分化、成熟及功能的抑制作用明显降低,从而推测VEGF在肿瘤的发生、发展和免疫抑制方面可能起着重要的作用;应用siRNA联合负载肿瘤抗原DC能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,为该课题进一步的体内实验和临床应用基因治疗联合免疫治疗提供理论基础。