Hepcidin是一种富含半胱氨酸的小分子多肽,有一定的抑菌活性,同时具有调节机体铁代谢的功能,其潜在的医用价值成为近年来研究的一个热点。但通过化学合成或从组织中提取获得Hepcidin的成本相当高且不容易操作,因此,利用生物学技术,采用微生物发酵手段在体外获得大量Hepcidin小肽成为当前的一个首选方法。巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)是目前应用最广泛的外源蛋白表达系统之·,具有易于操作培养、生长速度快、表达量高、可以对外源基因进行正确的翻译后加工与修饰、糖基化程度低、表达菌株稳定、可进行高密度发酵等优点。本试验根据毕赤酵母对密码子的偏好性,在不改变Hepcidin氨基酸序列的前提下,对其基因序列进行改造,并与真核表达载体pGAPZaA连接,转化DH5a感受态细胞,在含25μg/mL Zeocin抗生素的低盐LB平板初步筛选出阳性转化子,经PCR检测,EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切鉴定及DNA测序,证实插入片段的DNA序列与设计的猪Hepcidin基因序列完全一致。将线性化的重组质粒经电击导入毕赤酵母X-33中,采用含100μg/mL Zeocin抗生素的YPD培养基筛选阳性转化子,并通过提取酵母基因组进行PCR检测。用含不同浓度Zeocin的YPD培养基筛选高拷贝重组酵母菌。将重组酵母扩大培养,离心收集上清液,Tricine-SDS-PAGE电泳检测结果显示,在2.76kDa处有目的条带,表明Hepcidin在毕赤酵母中成功表达。采用液相生长抑制法测定重组蛋白的生物活性,结果显示,重组蛋白对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的均有明显的抑制作用。为今后Hepcidin在兽药、饲料添加剂方面的应用及其在铁代谢调节方面的研究奠定了基础。