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本论文探讨了本实验室自行合成的水溶性CdTe量子点作为一种新型的荧光纳米探针材料在生物应用方面的可能性,研究内容主要包括CdTe量子点与蛋白分子的共价连接; 量子点-蛋白标记物的纯化和表征; 采用直接荧光免疫法,对固定和活的人脐静脉内皮细胞膜上、细胞质内的靶分子进行了特异性细胞成像。
在水相CdTe量子点标记各种蛋白分子的实验中,我们系统的优化了量子点浓度、EDC浓度、蛋白浓度、反应时间等标记条件。成功用EDC一步法连接量子点和各种蛋白分子,其中蛋白分子包括了一般的非特异性牛血清蛋白BSA、糖蛋白荆豆凝集素UEA-1以及抗体anti-vWF。第一次运用激光诱导荧光的毛细管电泳对量子点的标记产物进行了分析。同时采用超滤离心装置对标记产物进行了纯化分离,达到了去除未结合蛋白的量子点以及除盐浓缩的效果。我们通过激光诱导荧光的毛细管电泳的表征手段证明:标记蛋白的含量高达96%。用离心超滤方法纯化标记产物的效果也很明显,通过纯化,QD-BSA的含量从43.6%提高到了97.1%,QD-UEA-1的含量从68.8%提高到了82.5%。
在将量子点的蛋白标记物应用到细胞成像的研究中,我们建立了一套量子点作为荧光探针用于固定细胞和活细胞的成像的方法,并对我们合成的水相CdTe量子点潜在的应用价值进行了探索。实验结果显示:荧光探针QD-UEA-1能够特异性标记经过固定处理的或活的人脐静脉内皮细胞的细胞膜上的靶分子L-fucose;荧光探针QD-anti-vWF也特异性地标记了固定处理过的人脐静脉内皮细胞中的标志性分子vWF。我们实验表明量子点是一种很好的荧光探针,具有广泛的应用前景。