TSMR1是本实验室克隆的人类心脏发育的候选基因,其功能研究目前还没有相关的研究报道。本实验室的前期研究成结果显示,在果蝇胚胎发育过程中,TSMR1影响果蝇胚胎心脏的发育过程。为了研究TSMR1调控心脏发育的作用机制,本文探讨TSMR1是否对心脏发育基因的启动子起调控作用。本文提取了野生型成虫果蝇的DNA,设计引物克隆果蝇心脏发育相关基因(Eve,Zfh-1,Odd,Prc,Svp,Smox),将扩增的基因片段通过一步克隆法连接至p GL3-basic荧光素酶报告载体,构建成p GL3-Eve,p GL3-Zfh1,p GL3-Odd,p GL3-Prc,p GL3-Svp和p GL3-Smox质粒,电泳测序鉴定。将这些质粒与PCMV-myc-TSMR1共转染至HEK293细胞,同时单转启动子报告质粒、p GL3-basic和PCMV-myc质粒。以p RL-TK作为内参,建立双荧光素酶报告系统。对荧光素酶报告基因检测系统分析心脏发育相关基因的启动子活性,并用独立样本t检验方法进行统计分析。结果表明:TSMR1基因能够增强心脏发育相关基因启动子的转录活性。为了进一步研究TSMR1是否通过结合在基因的启动子区域起转录调控作用,确定核心启动子区域,将心脏发育基因Svp、Prc、Smox和Zfh1的启动子区域进行分段分析,分别分为5-6段片段大约长为500bp的启动子片段。通过PCR扩增反应,将扩增片段通过一步克隆法连接至p GL3-basic荧光素酶报告载体,构建成荧光素酶报告质粒。同样利用荧光素酶报告系统检测启动子活性。结果表明:Svp核心启动子区域为-465—+40bp;Prc核心启动子区域为-1426—-900bp;Smox核心启动子区域为-1205—-646bp;Zfh1核心启动子区域为-2646—-2127bp。综上所述,本文证明果蝇TSMR1影响心脏发育基因启动子的活性,并鉴定出其影响心脏发育基因的核心启动子区域。该结果为进一步研究TSMR1在果蝇心脏发育过程中的调控机制奠定了基础。