背景和目的甲状腺癌是头颈部的常见恶性肿瘤,也是头颈部发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,近年来其发病率又有明显上升的趋势。甲状腺癌中最常见的病理类型是乳头状癌,呈浸润性生长,早期易发生淋巴结转移,而甲状腺癌治疗失败和患者死亡的主要原因就是肿瘤的复发和转移。因此如何控制甲状腺癌的浸润和转移成为研究的热点。AnnexinⅡ蛋白又称膜联蛋白,是钙磷脂结合蛋白(Annexins)家族的重要成员之一,在一系列钙离子介导的细胞活动如生物膜聚集、胞吐胞吞、离子通道形成、细胞增殖、细胞凋亡等过程中发挥重要作用。在乳腺癌、结肠癌、肺癌等多种恶性肿瘤中都观察到AnnexinⅡ的过度表达,位于细胞表面的AnnexinⅡ蛋白能够作为纤溶酶、纤溶酶原、t-PA、组织蛋白酶B、S100A4、S100A10等的结合受体,参与基底膜和细胞外基质的降解等过程,从而促进肿瘤的浸润和转移。组织型纤溶酶原激活剂(tissue-plasminogen activator, t-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator, uPA)是体内纤溶系统的主要成分,都属于丝氨酸蛋白酶家族成员,主要的生物学功能都是将纤溶酶原激活生成纤溶酶,在生理性止血、血栓降解、组织修复等生理过程中发挥重要作用。另外在许多肿瘤细胞中也存在t-PA和uPA的表达,其激活产生的纤溶酶可以引起基底膜和细胞外基质蛋白的降解,在肿瘤的浸润和转移过程中发挥重要作用。t-PA在血管内溶栓过程中的作用较uPA强,而在肿瘤发生发展中的作用不及uPA。uPA蛋白可以通过激活纤溶酶、促进肿瘤血管形成、启动信号转导等多种机制影响肿瘤的浸润转移。有关联合检测AnnexinⅡ、t-PA、uPA三种蛋白在甲状腺癌中的表达及其与肿瘤关系的研究,至今尚未见报道。为探讨三者与甲状腺癌发生发展的关系和三者之间的相互关系,本实验采用免疫组织化学法对AnnexinⅡ、t-PA、uPA蛋白在甲状腺正常组织、结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤和甲状腺乳头状癌组织中的表达情况进行检测,从蛋白水平探究三者在甲状腺癌发生发展和淋巴结转移过程中的作用,为甲状腺癌的早期诊断和恶性程度的评估提供依据,为甲状腺癌的基因治疗提供有效的作用靶点。材料与方法1.应用免疫组织化学法(SP)检测AnnexinⅡ、t-PA、uPA蛋白在35例甲状腺乳头状癌组织、10例甲状腺腺瘤组织、16例结节性甲状腺肿组织、7例甲状腺正常组织中的表达情况。2.统计学处理：采用SPSS 13.0统计学软件进行统计处理,两阳性率之间的比较应用χ2检验,两变量之间相关关系的研究应用Spearman相关分析。检验水准为a=0.05。结果1. AnnexinⅡ蛋白在甲状腺正常组织中的阳性表达率为14.29%(1/7),在结节性甲状腺肿组织中的阳性表达率为31.25%(5/16),在甲状腺腺瘤组织中的阳性表达率为30.00%(3/10),在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率为74.29%(26/35)。AnnexinⅡ蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达较正常组织、结节性甲状腺肿组织和腺瘤组织中的表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。而正常组织、结节性甲状腺肿组织、腺瘤组织中AnnexinⅡ蛋白的表达两两比较均无统计学意义(P>0.05)。AnnexinⅡ蛋白在癌组织中的表达与患者的性别、年龄无关,与肿瘤大小和淋巴结转移有关。AnnexinⅡ蛋白在男性组中的阳性表达率为60.00%(3/5),在女性组中的阳性表达率为76.67%(23/30),差异无统计学意义；AnnexinⅡ蛋白在患者年龄≥45岁组中的阳性表达率为73.33%(11/15),在<45岁组中的阳性表达率为75.00%(15/20),差异无统计学意义；AnnexinⅡ蛋白在肿瘤直径≥1.0cm组中的阳性表达率为86.96%(20/23),在<1.0cm组中的阳性表达率为50.00%(6/12),肿瘤直径≥1.0cm组中AnnexinⅡ蛋白的表达较<1.0cm组中的表达显著增高,差异有统计学意义；AnnexinⅡ蛋白在有淋巴结转移组中的阳性表达率为94.44%(17/18),在无淋巴结转移组中的阳性表达率为52.94%(9/17),有淋巴结转移组中AnnexinⅡ蛋白的表达较无淋巴结转移组中的表达显著增高,差异有统计学意义。2.t-PA蛋白在甲状腺正常组织中的阳性表达率为28.57%(2/7),在结节性甲状腺肿组织中的阳性表达率为43.75%(7/16),在甲状腺腺瘤组织中的阳性表达率为60.00%(6/10),在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率为85.71%(30/35)。t-PA蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达较正常组织、结节性甲状腺肿组织中的表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。而甲状腺乳头状癌组织与甲状腺腺瘤组织相比,t-PA蛋白的表达无统计学意义(P>0.05)。t-PA蛋白在正常组织、结节性甲状腺肿组织、腺瘤组织中的表达两两比较均无统计学意义。t-PA蛋白在癌组织中的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移均无关。t-PA蛋白在男性组中的阳性表达率为80.00%(4/5),在女性组中的阳性表达率为86.67%(26/30),差异无统计学意义；t-PA蛋白在患者年龄≥45岁组中的阳性表达率为86.67%(13/15),在<45岁组中的阳性表达率为85.00%(17/20),差异无统计学意义；t-PA蛋白在肿瘤直径≥1.0cm组中的阳性表达率为86.96%(20/23),在<1.0cm组中的阳性表达率为83.33%(10/12),差异无统计学意义；t-PA蛋白在有淋巴结转移组中的阳性表达率为88.89%(16/18),在无淋巴结转移组中的阳性表达率为82.35%(14/17),差异无统计学意义。3.uPA蛋白在甲状腺正常组织中的阳性表达率为14.29%(1/7),在结节性甲状腺肿组织中的阳性表达率为18.75%(3/16),在甲状腺腺瘤组织中的阳性表达率为40.00%(4/10),在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率为88.57%(31/35)。uPA蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达较正常组织、结节性甲状腺肿组织和腺瘤组织中的表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。而正常组织、结节性甲状腺肿组织、腺瘤组织中uPA蛋白的表达两两比较均无统计学意义(P>0.05)。uPA蛋白在癌组织中的表达与患者的性别、年龄以及肿瘤大小均无关,而与淋巴结转移有关。uPA蛋白在男性组中的阳性表达率为80.00%(4/5),在女性组中的阳性表达率为90.00%(27/30),差异无统计学意义；uPA蛋白在患者年龄≥45岁组中的阳性表达率为86.67%(13/15),在<45岁组中的阳性表达率为90.00%(18/20),差异无统计学意义；uPA蛋白在肿瘤直径≥1.0cm组中的阳性表达率为91.30%(21/23),在<1.0cm组中的阳性表达率为83.33%(10/12),差异无统计学意义；uPA蛋白在有淋巴结转移组中的阳性表达率为100.00%(18/18),在无淋巴结转移组中的阳性表达率为76.47%(13/17),有淋巴结转移组中uPA蛋白的表达较无淋巴结转移组中的表达显著增高,差异有统计学意义。4. AnnexinⅡ蛋白和t-PA蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达呈正相关关系(r=0.507,P<0.05)。5. AnnexinⅡ蛋白和uPA蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达呈正相关关系(r=0.405,P<0.05)。6.t-PA蛋白和uPA蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达呈正相关关系(r=0.367,P<0.05)。结论1. AnnexinⅡ、t-PA、uPA蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达均高于正常甲状腺组织和甲状腺良性病变中的表达,且从正常组织到良性病变再到恶性肿瘤的演变过程中,AnnexinⅡ、t-PA、uPA蛋白的表达均逐渐升高,提示三种蛋白可能参与了甲状腺乳头状癌的发生发展过程。2.随着甲状腺乳头状癌直径的增大,AnnexinⅡ蛋白的表达逐渐增高,表明AnnexinⅡ蛋白可能促进了甲状腺乳头状癌的生长；有淋巴结转移组中AnnexinⅡ、uPA蛋白表达明显高于无淋巴结转移组中的表达,表明AnnexinⅡ、uPA蛋白在甲状腺乳头状癌淋巴结转移过程中发挥促进作用。3. AnnexinⅡ、t-PA、uPA蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达两两之间均呈正相关关系,表明三种蛋白的表达具有一致性,提示三者在甲状腺乳头状癌的发生发展过程中起协同作用。