新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)强毒株引起的一种急性、烈性传染性疾病。近年来，该病已成为危害鹌鹑养殖业的主要疫病之一。我国多个省份已有该病暴发和流行的报道，在经济上给鹌鹑养殖业造成重大的损失。　　本研究根据GenBank上发表的不同禽类Toll样受体信号通路中部分固有免疫相关因子（TLR3、TLR7、IL-6、IL-8、IFNα、AvBD-9）及内参基因(β-actin)的序列并参阅相关文献报道，设计并合成7对特异性引物。利用合成的引物通过PCR方法扩增出目的片段，然后进行基因克隆，构建质粒标准品，建立检测上述基因的荧光定量PCR方法(qRT-PCR)，进行特异性和重复性试验。结果表明，建立的TLR3、TLR7、IL-6、IL-8、IFNα、AvBD-9和β-actin实时荧光定量PCR标准曲线的线性相关系数在0.99～1.00之间、扩增效率在1.83～2.13之间且溶解曲线在40个循环内呈现单一溶解峰。重复性检验结果中各目的基因批内和批间变异系数都小于4.0％，标准差小于0.5。上述结果证明建立的qRT-PCR检测方法具有特异性强、稳定性和可重复性高的特点，为定量分析鹌鹑固有免疫相关因子mRNA转录水平提供了技术支持。　　为探究不同基因型NDV对鹌鹑的致病性差异，本课题选用基因Ⅶ型GXQ53毒株、基因Ⅷ型GXGF12001毒株和基因Ⅸ型F48E8国内参考毒株人工感染35日龄的非免疫鹌鹑，观察、记录试验动物临床症状并打分，在感染后5、8、11天观察各试验组鹌鹑的脾脏、大脑和盲肠扁桃体的病理学变化并记录得分;采集组织样品进行病理组织学观察、病毒载量测定和0固有免疫相关因子基因表达量的测定。具体结果如下:　　(1)感染组均表现出典型的新城疫临床症状和剖检病变，其中F48E8组、GXGF12001组、GXQ53组临床症状得分分别为12.0分、6.0分和6.0分，剖检病变平均得分分别为3.0分、1.67分和1.83分。病理组织学检测结果表明，F48E8、GXGF12001和GXQ53毒株对脾脏、盲肠扁桃体和脑均能产生不同程度的损伤，其中脾脏和盲肠扁桃体两个免疫器官均表现出淋巴细胞减少、出现坏死灶，随着感染时间增加F48E8组和GXGF12001组病变加剧，而GXQ53组有逐渐转归的迹象。而大脑的病变以小胶质细胞增生为主，随着时间推移病变都有加剧的趋势。综合病理组织结果来看，F48E8对免疫系统和神经系统的损伤能力比GXGF12001的强，而GXQ53组弱于前两组。　　(2)试验组鹌鹑的脾脏、盲肠扁桃体和大脑中病毒载量检测结果表明，F48E8毒株和GXGF12001毒株不仅可在脾脏和盲肠扁桃体中复制，还可以通过血脑屏障浸染到大脑中。而GXQ53毒株只在盲肠扁桃体中复制。病毒拷贝数显示脾脏中GXGF12001毒株的复制能力强于F48E8毒株，而F48E8毒株在脑中的复制能力强于GXGF12001毒株。盲肠扁桃体中复制能力强弱顺序为:GXGF12001毒株＞F48E8毒株＞GXQ53毒株。　　(3)鹌鹑感染NDV后不同组织中固有免疫相关因子的相对表达量结果如下:TLR3、TLR7、IL-6、IL-8、IFNα、AvBD-9在脾脏、大脑和盲肠扁桃体中都有表达。其中，TLR3、IL-6和IL-8在脾脏中表达显著上调(P＜0.05)，盲肠扁桃体中TLR7、IL-8、AvBD-9和IL-6表达显著上调(P＜0.05)，脑中IFNα和AvBD-9显著上调(P＜0.05)，且这些组织中细胞因子的相对表达量与病毒的拷贝数趋于正相关。综上所述，我们推测TLR3、TLR7、IL-6、IL-8、IFNα、AvBD-9可能参与鹌鹑对NDV感染的免疫反应。　　本课题成功建立了检测鹌鹑固有免疫相关因子TLR3、TLR7、IL-6、IL-8、IFNα、AvBD-9和内参基因β-actin荧光定量方法;人工感染试验表明基因Ⅶ型GXQ53毒株、基因Ⅷ型GXGF12001毒株和基因Ⅸ型F48E8毒株对非免疫鹌鹑具有组织嗜性，病毒可在脾脏、盲肠扁桃体和大脑中增殖并对这些组织器官造成损伤，且F48E8毒株的致病性强于GXGF12001毒株，而GXQ53毒株的致病性最弱，它们都能引起鹌鹑的发病死亡。由所检测的细胞因子mRNA结果推测TLR3、TLR7、IL-8、IFNα在鹌鹑脾脏、脑和盲肠扁桃体中可能参与鹌鹑对新城疫病毒感染的免疫反应，而IL-6在脾脏和盲肠扁桃体中表达量显著上调，以及AvBD-9在脑中的表达量显著上调，可能与TLR7介导的MyD88依赖途径以及TLR3介导的TRIF依赖途径有关。