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目的：研究胰蛋白酶酶解法及丙酮沉淀法提取蜈蚣的最佳工艺条件,并检测分离纯化的多肽类有效部位抗肿瘤活性。方法：1.采用L9(34)正交设计法,取胰酶用量、酶解温度和酶解时间三个因素,各取三个水平,并结合丙酮沉淀法制备蜈蚣多肽类有效部位粗提物。以提取率为指标结合MTT法检测各粗提物对人肝癌HepG2细胞的IC50筛选出最佳提取工艺条件。2.采用Sephadex G-25凝胶过滤层析对最佳工艺所得粗提物进行分离纯化,采用MTT法检测纯化物对HepG2细胞、Bel-7042细胞和A549细胞的增殖抑制作用,高效液相色谱检测最有效部分的成分情况,Hoechst荧光染色法观察HepG2细胞凋亡形态,流式细胞术检测细胞凋亡与周期。结果：1.胰蛋白酶酶解法最佳工艺为：2.0g蜈蚣超微粉,胰酶量为0.1g,酶解温度为46℃,酶解时间为4h。2.经Sephadex G-25凝胶过滤层析分离得到三部分,其中第二部分对肝癌HepG2细胞Bel-7042和A549细胞杀伤作用最大。3.与阴性对照组比较,纯化物A2作用后的HepG2细胞周期表现为GO/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例均升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论1.本研究验证了利用酶解法、凝胶层析分离纯化工艺提取蜈蚣小分子多肽类有效部位的可行性。2.所筛选出的蜈蚣小分子多肽类有效部位纯化物A2具有显著的体外抗肿瘤活性。3.所筛选出的蜈蚣小分子多肽类有效部位纯化物A2可通过诱导细胞凋亡,使细胞停滞于G2/M期,减少有丝分裂,从而抑制肿瘤生长。关键字：蜈蚣；提取工艺；正交设计；分离纯化；抗肿瘤